传代方法	1:2传代
传代情况	2~3天换液
培养体系	DMEM+10%FBS
细胞描述	1964年建株；甲基胆蒽植入Km小鼠脑内诱发星形细胞瘤，传至第120代后转为胶质细胞瘤；瘤细胞悬液同系小鼠皮下、肌肉、脑内移植，成功率皆100%。肌肉及脑内移植可形成较规律的移植性瘤株，存活时间脑内型15.9±4.8天；肌肉型20.3±6.6天。
冻存条件	无血清细胞冻存液

二、细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。

收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，

严格无菌操作，培养箱静置 2-4 小时。镜下观察：未超过 80%汇合度时，可将瓶装的完全培

养液收集至离心管中，加入 6ml 完全培养基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度

时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，

放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一

瓶用自己配的完全培养基）

三、细胞培养步骤

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基

混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然

后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二

天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（

0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化

1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，

轻敲几下培养瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在 1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃去上清液，补加

1-2mL 培养液后吹匀。

4. 按 5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按 1：2 的比例分到新的含 5-6 ml 培养液的新皿中

或者瓶中。

PS：若客户收到 2ml 小管细胞，收到细胞后，用 75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或

安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至 T25 培养瓶或 6cm 培养皿，加入 5ml 左右完

全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过 80%，换液继续培养，

视情况传代或者冻存。若密度超过 80%，可直接进行传代（方法同上）。

产品名称 小鼠脑神经胶质母细胞带荧光素酶；G422/Luc

生长特性 贴壁生长

冻存条件

无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系 DMEM+10%FBS

传代方法 第一次建议 1:2 传代

传代情况

2 天换液

备注

用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养NO.YS2298C

3）细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一

次；

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后

加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，

1000rpm 离心 5min；

3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。

四、售后服务告知书

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品 48 小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置 24 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后 24 小时后，绝大多数细胞

未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后 24 小时后或常温发货的细胞静置 4 小时候并且未开封，出现

污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品 7 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定

细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第 2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题有

提供收到细胞前 3 天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术

人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方

进行协商处理或者按合同价的 50%收费重发。

二）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前 3 天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到 2 天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定