细胞名称：H9

细胞描述：人胚胎干细胞，曾用名WA09

形 态：球形克隆，贴壁生长

来源性别：女性

组织：内细胞团

冻存日期/代数：详见 冻存管/培养瓶 标识

建议复苏培养体系：1 个 T25 培养瓶或6cm培养皿

细胞状态：良好

支原体检测结果：阴性

细胞用途：仅供科研使用。

STR鉴定结果：

Amelogenim：X

D5S818：11，12

D13S317：9

D7S820：9，11

D16S539：12，13

vWA：17

THO1：9

TPOX：10,11

CSF1PO：11

H9细胞完全培养基培养人胚胎干细胞

1.试剂和材料

H9细胞完全培养基试剂盒

成分	规格	数量	储存条件
H9细胞基础培养基	500mL	1瓶	2-8℃
H9细胞培养基添加剂	5mL复溶	1支	-20℃

所需的其它试剂和材料

产品	规格
Y27632	1mg
Matrix	5mL
H9细胞消化液	500mL
另需细胞培养皿/瓶/板，15mL离心管和移液管等细胞培养耗材

2.培养流程

2.1.复苏

在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。

1. 将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。

2. 使用移液管将冻存管中含有H9细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。

3. 室温300g离心5min。

4. 吸出培养基，确保细胞团完整。

5. 然后缓慢加入1mL完全培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。

6. 轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。

7. 将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。

2.2.传代

当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。

1. 传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。

2. 吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。

3. 加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。

4. 37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。

5. 加入适量的完全培养基终止消化。

6. 移入离心管，300g离心5min，

7. 离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。

8. 传代比例为 1：6—1：8，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。

9. 将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。

2.3.冻存

当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。

1. 传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。

2. 吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。

3. 加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。

4. 37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。

5. 加入适量的完全培养基终止消化。

6. 移入离心管，300g离心5min。

7. 离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。

8. 使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团，然后将细胞悬液转移至冻存管，冻存按 6 孔板每孔冻 1 支，6cm 皿冻 2-4 支，10cm 皿冻 6-12 支（冻存液为：90%H9细胞完全培养基与 10%的DMSO。

注意事项

 

1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。