传代方法	第一次建议1:2传代	冻存条件	细胞库无血清冻存液
细胞描述	GP2d has been established from the same adenocarcinoma as GP5d (ECACC catalogue no. 95090715). This has been confirmed by STR profiling at ECACC. The cells were derived from a local recurrence of Duke's grade B, poorly differentiated carcinoma of the colon from a 71 year old female at surgical resection. The patient received no preoperative chemo- or radiotherapy and had a strong family history of colon cancer with two first degree relatives dying of the disease below the age of 55 years. Both clones possess genetic changes consistent with the pattern of tumour progression in colon cancer but are morphologically distinct. An interstitial deletion on chromosome 5 (region 14q to 22q) and an inverted duplication of bands 10q11 and 10q21 has been reported. Both cell lines contain a normal copy of the ki-ras gene and a copy with a transition in codon 12. GP2d cells show growth response to EGF, TGF alpha or insulin with an increase in cell numbers. Amphiregulin mRNA is abundant in GP2d but almost undetectable in GP5d. 该细胞系培养所用基础培养基为 DMEM/F12,配置完全培养基时需加入 10%FBS, 10ng/mL EGF，1%Anti-Anti 倍增时间：48-60hours  保藏机构：ECACC; 95090714    本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。
培养备注	用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养

 

培养瓶中细胞操作步骤

对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。

2. 对于贴壁的细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中的多余培养基，至剩余5-8mL左右，随后将细胞置于含有5%CO的37℃恒温 培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶请立即传代。

3. 对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于含有5% CO 的37℃恒温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤

注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。

2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离心

4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用将细胞置于含有5%CO 的37℃恒温培养箱中培养。

贴壁细胞传代培养

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS清洗一次。

2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。

3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4. 离心

5. 将细胞置于含有5%

传代比例：建议 1:2 （以培养瓶底面积计算）

培养基换液: 每隔 2 至 3 天。