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仅供科研使用，不得用于诊断
猪产气荚膜梭菌α毒素抗体检测试剂盒
（酶联免疫法）
线性范围：0.32-20 IU/mL
1. 预期用途
本试剂盒用于检测血清、血浆等样本中的猪产气荚膜梭菌α毒素抗体浓度，仅供研究使用。
2. 检测原理
试剂盒采用双抗原夹心法原理：将猪产气荚膜梭菌α毒素抗原包被于酶标板上，加入样品，样品
中的抗体被捕获，结合形成“抗原-抗体”免疫复合物，清洗去除游离的杂质，再加入 HRP 标记
的抗原，形成“抗原-抗体-酶标抗原”夹心复合物，清洗去除多余的酶标抗原，加入 TMB 显色，
再加入终止液，用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值，颜色的深浅和样品中的待测抗体的浓度呈正比。
3. 包含的实验材料实验材料
名 称
Label
组成成分
Kit Components
数量（48T）
Quantity
数量（96T）
Quantity
酶标板
预包被捕获抗体的酶标板
8×6 条
8×12 条
校准品（10×）
待测物（200 IU/mL）
1 支×100μL
1 支×200μL
酶标记物（100×）
100 倍浓缩 HRP 酶标记抗原
1 支×50μL
1 支×100μL
通用稀释液（20×）
样品/校准品/酶标记物通用稀释液
1 支×10mL
1 支×15mL
浓缩洗液（20×）
20 倍浓缩洗液
1 支×15mL
1 支×25mL
显色剂
TMB、过氧化氢
1 支×6mL
1 支×12mL
终止液
稀硫酸
1 支×3mL
1 支×6mL
如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。
4. 需要但未包含的实验材料
· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套枪头；
· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
5. 试剂的准备及储存
· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在 37℃下加热至晶体全部溶解后使用。
用蒸馏水 1:20 稀释，例如：10mL 浓缩洗涤液加入 190mL 的蒸馏水，混合均匀。
1×通用稀释液的配制：用蒸馏水 1:20 稀释，例如：10mL 的 20×浓缩通用稀释液加入 190mL
的蒸馏水，混合均匀。www.yajimall.com
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1×酶标记物工作液的配制：100×酶标记物用“1×通用稀释液”按 1:100 倍稀释，例如：10uL
的（100×）酶标记物加入 990uL 的“1×通用稀释液”，混合均匀。配制好的 1×酶标记物工
作液可以在 2~8℃保存 8h。
· 工作校准品的配制：校准品开封前应离心 30 秒，确保所有校准品集中于底部；
准备 7 个离心管，将 10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液”稀释 10 倍配制成校准
品 S1。例：50uL 的 10×校准品+450uL 的“1×通用稀释液”，制备得到 500μL 的 S1 浓度校
准品。在随后的 6 个离心管中分别加入 250μL 的“1×通用稀释液”，在这 6 个试管中（S2~S7）
将 S1 校准品依次倍比稀释 6 个梯度至 S7，共配制 7 个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、
S4、S5、S6、S7，如下图所示，“1×通用稀释液”作为零浓度校准品 S0，共 8 支校准品。
6. 样品采集、预处理及储存
· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在 1000×g 下离
心 15 分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时
进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过 6 个月，样品冻融
不超过 2 次。
· 血浆：使用 EDTA 或肝素采血管收集血浆。全血采集后以 1000×g 离心 15 分钟取得血浆。操
作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多
份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过 6 个月，样品冻融不超过 2 次。
· 组织：组织称重后剪碎，将剪碎的组织加入裂解液，一般按 1:4-1:9 的重量体积比，比如 100mg
的组织样品对应 400uL 的裂解液，具体可根据实验需要适当调整，最后将匀浆液于 5000×g 离
心 5-10 分钟，取上清检测。
· 细胞：取适量细胞，于冰上进行超声破碎，5000×g 离心 5-10 分钟，取上清检测。
· 细胞上清：取细胞上清于 5000×g 离心 5-10 分钟，取上清检测。
7. 实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡 30 分钟左右，也可置于 37℃温箱快速回温至室温。
注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
1
编号
检测试验需设置校准品孔、样品孔，合理规划各样本的排布。
2
稀释
加样
校准品孔：每孔加入校准品 100uL，（S0-S7，共 8 个浓度）。
样品孔：每孔加入 1×通用稀释液 50uL，再加入样品 50uL。*
测细胞：每孔加入细胞上清 100uL。
3
温育
盖上封板膜，在 37℃下孵育 60 分钟
4
洗板
洗板 3 次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。
5
加酶
每孔加入 100μL 酶标记物工作液。www.yajimall.com
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6
温育
盖上封板膜，在 37℃下孵育 60 分钟。
7
洗板
洗板 5 次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。
8
显色
每孔加入显色剂 100uL，37℃避光显色 15 分钟。
9
终止
每孔加终止液 50uL。
10
测定
使用酶标仪在选择 450nm 波长进行检测。
* 样品稀释液 50uL，加样品 50uL 样品稀释倍数为 2 倍。
* 样品稀释液 80uL，加样品 20uL，则稀释倍数为 5 倍。
* 如样本珍贵量少，可适当加大稀释倍数，应当进行预实验确定最佳稀释倍数。
8. 结果计算
双波长检测结果无需进行调 0，可直接进行标曲拟合及结果计算。
以下曲线拟合方式均可使用，选择拟合后 r 值最佳的拟合方式进行结果计算。
四参数逻辑（4-P）曲线拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；
多项式曲线拟合：2 次多项式、3 次多项式；
双对数直线拟合：以浓度值取对数，吸光度值取对数后，进行直线拟合；
点对点拟合：各相邻点之间分别单独进行线性拟合，分段计算；
推荐使用专业化软件进行结果拟合和计算，如 ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism 等。
**最终样本浓度应乘上样本的稀释倍数。
曲线拟合方式示例图，以下数据和曲线仅供示例，与本试剂盒测定结果无关。
9. 检测的局限性
样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释
倍数。样本浓度低于 LOQ 定量限时，检测结果无法进行准确定量。
10. 产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
灵敏度：0.18 IU/mL
精密度：板内精密度 CV＜10%（N=20），板间精密度 CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为 10μg/mL 测定，没有观察
到明显的交叉反应。
11. 注意事项www.yajimall.com
仅供科研使用，不得用于诊断
· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！
· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。
· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。
12. 技术要点
· 不同批次的试剂盒不能混用，不建议将不同板上的微孔板条组装在一块板上检测，尽管是同
一批次试剂，也可能存在板与板之间的差异。
· 每次实验时应当始终配制标准曲线平行检测，不能将上一次的标准曲线用于下一次实验结果
的计算。
· 不要使用超过有效期的试剂盒进行检测。
· 底物显色剂应当为无色，如变蓝表明已变质，不能应用于实验。
· 使用适当的封板膜密封微孔板条，以便检测结果更加可靠。
· 操作时尽量避免产生气泡。不要将不同试剂瓶的瓶盖交叉使用。
· 应当遵循说明书的操作进行实验，不按照说明书的操作将导致实验结果的变化，任何不遵循
说明书的实验操作应当事先询问售后技术支持的建议。否则我们不保证实验结果的可靠。
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