小鼠脾脏naive CD8+T细胞分离试剂盒（阴选）-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
T25	￥ 3800	11

小鼠脾脏naive CD8+T细胞分离试剂盒（阴选）产品描述

Naive CD8⁺T细胞，即初始CD8+T 细胞，是指未接触过特异性抗原、处于静息状态的CD8+T细胞亚群，它们通常表型为‌CD8+CD62L+CD44-，是适应性免疫应答中细胞毒性免疫反应的核心起始细胞，同时也是连接固有免疫与适应性免疫的重要桥梁之一，具备自我更新能力与高度分化可塑性，在接收特异性抗原刺激及细胞因子调控后，可定向分化为细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和记忆CD8+T细胞。‌

试剂盒组成信息

表2. 试剂盒组成信息（10/20/50t）

产品名称	产品规格	储存条件
小鼠脾脏naive CD8+T细胞阴性分选抗体	200 μL	2-8°C 6 个月
	400 μL	2-8°C 6 个月
	1000 μL	2-8°C 6 个月
小鼠脾脏naive CD8+T细胞阴性分选磁珠	200 μL	2-8°C 6 个月
	400 μL	2-8°C 6 个月
	1000 μL	2-8°C 6 个月

小鼠脾脏naive CD8+T细胞分离试剂盒（阴选）分离步骤

1.取新鲜小鼠脾脏一只，在70 μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的PBS冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于50 mL离心管中，500 g，离心5 min（一个小鼠脾脏可取得0.8-1.5×108个脾脏细胞）。

2.离心结束，弃上清，加入5 mL红细胞裂解液，室温裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g，离心5 min。

3.离心完成后，弃上清，将脾脏细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后，计数。计数完成后，将脾脏细胞悬液500 g，离心5 min。

4.将细胞重悬于分选buffer中，调整细胞密度为1×108cells/mL（分选buffer为含有2 mM EDTA 和2%胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5%BSA的PBS，使用前需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌）。

5.取100 μL细胞悬液加入20 μL小鼠脾脏naive CD8+T细胞阴性分选抗体混合均匀，4°C孵育10min，期间每隔3 min 轻弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

6.吸取20 μL naive CD8+T细胞分选磁珠（吸取前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完全重悬，加入1 mL CD8+ T细胞分选Buffer进行重悬清洗磁珠，磁力架吸附5 min，弃去上清，加入20 μL的naive CD8+T细胞分选 Buffer重悬）。

7.孵育完成的细胞中直接加入20 μL naive CD8+T细胞分选磁珠，混匀后4°C孵育10min（此试剂盒说明书为分选1×107个脾脏细胞中的naive CD8+T细胞的使用说明，如果分选更多的细胞，则可按比例增加小鼠脾脏naive CD8+T细胞阴性分选抗体、naive CD8+T细胞分选磁珠的用量，少于1×107个细胞则将细胞悬液体积补至100 μL，加入20 μL小鼠脾脏naive CD8+T细胞阴性分选抗体和20 μL naive CD8+T细胞分选磁珠）。

9.孵育完成后，加入1 mL的naive CD8+T细胞分选Buffer重悬。

10.将含有细胞的EP管置于磁力架上，静置5 min，待磁珠被吸附，细胞悬液变为清澈后将细胞悬液吸入一个无菌离心管中，此细胞悬液中即包含纯化的小鼠脾脏naive CD8+T细胞，300 g，离心3 min，弃去上清，收集细胞。