HIV-1/HIV-2双重探针法荧光定量PCR试剂盒使用方法
一、核酸提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品核酸，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（离心柱型）（Cat: GZ010702-50）提取核酸。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。
3. 在7号管中加入5 μL 1.00E+08拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1.00E+07拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1.00E+07拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1.00E+06拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1.00E+06拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1.00E+05拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释到1.00E+05拷贝/μL即可。
HIV-1/HIV-2双重探针法荧光定量PCR试剂盒结果分析
1. 如果制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，推算出其浓度。
2. 如果无需制作标准曲线，按照如下标准判定结果：
阳性对照（1.00E+05拷贝/μL）结果：FAM/ VIC通道的Ct值<30，有明显指数增长，呈典型的S型曲线。 阴性对照结果：FAM/ VIC通道的Ct值≥40或无Ct值，无明显指数增长期和平台期。 样本检测结果：FAM/ VIC通道的Ct值<38，有明显指数增长，表明样本中检测出通道对应的病毒，结果为阳性；Ct值≥40或无Ct值，表明样本中未检测出通道对应的病毒，结果为阴性；Ct值在38-40范围，应对样本进行复检，如重复实验结果Ct值仍在38-40范围，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。
