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维生素C检测试剂盒(菲咯啉比色法)
一、产品简介：
维生素 C(Vitamin C)又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养
素，在生物体内维生素C是一种抗氧化剂，为酸性已糖衍生物，是稀醇式已糖酸内酯，保
护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。Vc有
L-型和 D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。
雅吉生物维生素C检测试剂盒（菲咯啉比色法）检测原理是在酸性条件下，维生素C把三价铁离子还原成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以分光光度计534nm处检测吸光度，在一定浓度范围（样品浓度控制在0.5~35μg/ml）吸光度与维生素C含量呈线性关系，获得Vitamin C含量，主要用于植物组织中的维生素C（抗坏血酸）的检测，
其优点是:
1、反应稳定;
2、操作简便
3、还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，专一性好。
本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途，
二、产品组成：
| 名称规格 | L2032-100T | 存储 |
| 试剂A: Vitamin C标准 | 25mg | RT避光 |
| 试剂B 组织匀浆液（5x） | 500ml | RT避光 |
| 试剂C: 酸性缓冲液 | 25ml | RT |
| 试剂D: Vitamin C Assay Buffer | 25ml | RT |
| 试剂E: 菲咯啉显色液 | 50ml | RT避光 |
三、自备材料：
蒸馏水、无水乙醇
研钵或匀浆器、离心机、离心管或试管
比色
四、操作步骤(仅供参考)：
1、稀释组织匀浆液:按组织匀浆液(5x):蒸馏水=1:4的比例稀释，获得1x组织匀浆液
2、准备样品:取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量 2~3g，加入研磨
器内，再加入少量 1x组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1x组织匀浆液研磨，最
后一并倒入 50ml离心管，补充1x组织匀浆液至 22ml，充分混匀，4000g离心5min，上清液即为待测液。
3，配制系列 Vitamin C标准:将 25mg Vitamin C 标准用1ml 1x组织匀浆液溶解即得
Vitamin C标准(25mg/m)，再用1x组织匀浆液稀释成 Vitamin C标准(50ug/m)，取
干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。配置好的Vitamin C标准(25mg/m)
放置-20℃℃，短期保存。
| 加入物（μL） | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| VitaminC标准(50μg/ml) | 40 | 100 | 160 | 200 | 400 | 600 |
| 1x组织匀浆液 | 960 | 900 | 840 | 800 | 600 | 400 |
| 相当于 Vitamin C含量(μg) | 2 | 5 | 8 | 10 | 20 | 30 |
4，Vitamin C加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入
并注意避免产生气泡;如果样品中的 Vitamin C含量过高，可以减少样品用量或适当稀
释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
| 加入物（ml） | 空白孔 | 标准孔 | 测定孔 |
| 1x组织匀浆液 | 1.0 | —— | —— |
| 系列 Vitamin C标准(1~6号) | —— | 1.0 | —— |
| 待测液 | —— | —— | 1.0 |
| 无水乙醇 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 混匀 | |||
| 酸性缓冲液 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 菲咯啉显色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| Vitamin C Assay buffer | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
5、Vitamin C测定:混匀，30℃温箱中反应 60min，以空白管调零，比色杯光径1cm
分光光度计测定 534nm 系列标准管、测定管的吸光度。
五、计算：
计算:以系列标准Vitamin C(0、2、5、8、10、20、30μg)为横坐标
以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程，以测定孔的吸光度代入回归方程
求得样品维生素C含量。
1维生素C含量(mg/100g)=(m0×VT×100)/(m1×Vs×1000)
式中:
m0: 根据待测样品的吸光度这标准曲线求得的维生素C的质量（μg）
VT:待测液的总体积(ml)
m1:样品质量(g)
Vs = 测定时取样体积（ml）
100=100g
1000=μg与mg的换算系数
六、注意事项：
1、避免反复冻融，以免失效或效率下降,
2、组织匀浆液有腐蚀性，应小心操作，避免直接接触。
3、加样后反应不完全，因此不能立即测定，一般情况下60min 内即可充分反应，应当在
60~120min 内测定完成。
4、待测样品如不能及时测定，应置于 2~8℃保存，3 天内稳定
5、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
七、有效期：六个月有效。
维生素C检测试剂盒(菲咯啉比色法)
