组织活性氧（ROS）检测试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
48T	￥ 500	10
96T	￥ 980	10

组织活性氧(ROS)检测试剂盒

注意：

1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定；

2、为了您的安全和健康，请佩戴好防护用具；

测定意义：

活性氧(reactive oxygen species, ROS)是植物体内的一把“双刃剑”。ROS作为信号分子在植物生命活动中发挥关键作用, 但ROS过量积累会造成氧化损伤，测定ROS含量对于评估植物细胞内的氧化还原状态至关重要。

测定原理：

ROS荧光探针是一类无色、无荧光的染料分子，利用化学荧光指示剂即荧光探针:2',7-Dichlorofluorescin Diacetate，(DCFH-DA),在细胞内与ROS发生反应后生成具有强荧光的产物，通过检测产物的荧光强度可在一定程度上反映组织内的活性氧，这种荧光信号在激发波长488nm和发射波长525nm处有最大波峰，其荧光强度和活性氧水平成正比。

自备仪器和用品：

荧光酶标仪、黑色96孔板、可调式移液器、低温离心机、研钵/匀浆器、300目尼龙网、冰和蒸馏水。

试剂清单：

试剂名称	规格	数目	贮藏	备注
提取液	液体 150mL	x1	4°C
试剂一	液体	x1	-20°C	低温时可能出现结晶现象，使用前室温震荡溶解即可

样本处理（按照步骤依次操作）：

一、组织样品

1. 直接匀浆提取法：

称取约0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4°C离心10min取上清待测，建议提取后尽快反应测定。

2. 网搓法：称取0.1组织立即放入预冷的提取液中，清洗处理干净后，将组织块剪成厚度小于1mm薄片，放在预冷提取液中进行漂洗。将300目尼龙网扎在小烧杯上，将剪碎的组织放在网上，用镊子等轻搓组织块，边搓边用提取液冲洗，直至将组织搓完。收集细胞悬液，500g，4℃离心10min，去上清留沉淀，并用提取液洗1～2次。

3. 酶解法：

使用酶解液制备组织原生质体（需要自行处理）

二、液体样本

澄清样本可直接检测，若浑浊则离心取上清检测；

实验准备：

1、荧光酶标仪预热30min，设定激发波长488nm，发射波长525nm；

2、所有试剂解冻至室温（25°C）

测定操作：

1、在黑色96孔板中依次操作

试剂名称（μL）	测定管	空白管
试剂一	2	2
样本	200
提取液		200
混匀，37°C避光孵育30min后于激发波长488nm，发射波长525nm处读取荧光值F。荧光强度=F测定-F空白

注意：

1、若荧光值较小（小于200Au），可以增加37C孵育反应时间T(如增至1小时)，或增加试剂一(由 2μL 增至5μL)；改变后的T需代入公式重新计算。

若荧光值较大（大于4000Au），可以减少37℃孵育反应时间T(如减至10min)，或稀释试剂一(稀释5~10倍)；改变后的T需代入公式重新计算。

结果计算：

1、按照样本质量计算:

活性氧强度定义:每克组织每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。

活性氧强度=荧光强度÷T÷W×V

2、按照样本蛋白浓度计算:

活性氧强度定义:每毫克组织蛋白每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。

活性氧强度=荧光强度÷T÷Cpr×V

3、按照液体体积计算:

活性氧强度定义:每毫升液体每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。

活性氧强度=荧光强度÷T÷V1

T：反应时间，30min；

V：加入提取液体积，1ml组织活性氧(ROS)检测试剂盒

W：组织重量，g

Cpr：蛋白浓度，mg/ml;可使用本公司蛋白含量试剂盒测定

V1：测定加入样品体积，0.2ml

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产品详情

注意：

1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定；

2、为了您的安全和健康，请佩戴好防护用具；

测定意义：

测定原理：

自备仪器和用品：

试剂清单：

样本处理（按照步骤依次操作）：

一、组织样品

1. 直接匀浆提取法：

称取约0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4°C离心10min取上清待测，建议提取后尽快反应测定。

3. 酶解法：

使用酶解液制备组织原生质体（需要自行处理）

二、液体样本

澄清样本可直接检测，若浑浊则离心取上清检测；

实验准备：

1、荧光酶标仪预热30min，设定激发波长488nm，发射波长525nm；

2、所有试剂解冻至室温（25°C）

测定操作：

1、在黑色96孔板中依次操作

1、若荧光值较小（小于200Au），可以增加37C孵育反应时间T(如增至1小时)，或增加试剂一(由 2μL 增至5μL)；改变后的T需代入公式重新计算。

若荧光值较大（大于4000Au），可以减少37℃孵育反应时间T(如减至10min)，或稀释试剂一(稀释5~10倍)；改变后的T需代入公式重新计算。

结果计算：

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产品详情

注 意：

1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定；

2、为了您的安全和健康，请佩戴好防护用具；

测定意义：

测定原理：

自备仪器和用品：

试剂清单：

样本处理（按照步骤依次操作）：

一、组织样品

1. 直接匀浆提取法：

称取约0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4°C离心10min取上清待测，建议提取后尽快反应测定。

3. 酶解法：

使用酶解液制备组织原生质体（需要自行处理）

二、液体样本

澄清样本可直接检测，若浑浊则离心取上清检测；

实验准备：

1、荧光酶标仪预热30min，设定激发波长488nm，发射波长525nm；

2、所有试剂解冻至室温（25°C）

测定操作：

1、在黑色96孔板中依次操作

1、若荧光值较小（小于200Au），可以增加37C孵育反应时间T(如增至1小时)，或增加试剂一(由 2μL 增至5μL)；改变后的T需代入公式重新计算。

若荧光值较大（大于4000Au），可以减少37℃孵育反应时间T(如减至10min)，或稀释试剂一(稀释5~10倍)；改变后的T需代入公式重新计算。

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