产品及特点
本试剂盒可用于检测样本中是否含有登革热病毒。登革热病毒（Dengue virus)是一种RNA 病毒，是登革热、登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的病原体，以埃及伊蚊和
白纹伊蚊为传播媒介，广泛流行于全球热带及亚热带的 60 多个国家和地区，每年超过一亿人受感染，25 亿以上的人受到威胁，登革病毒的传播现已经成为热带、亚热带地区严
重的公共卫生问题。本产品是根据染料法荧光定量 RT-PCR 原理开发的登革热病毒检测试剂盒，
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物等组分经过优化，灵敏度高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据登革热病毒 RNA 序列高度保守区设计，不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的染料法荧光定量 RT-PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研
使用方法
一、RNA 提取(样本制备区)
用自选方法提取纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。建议使用病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒（Cat: GZ010702-50）提取 RNA。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
（由于阳性对照浓度高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光模板稀释液，（最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释到 1×10E5 拷贝/μL 即可。
结果分析
1. 如果制作标准曲线，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，推算出其浓度。
2. 如果未制作标准曲线，按照如下标准判定结果：
阳性对照（1×10E5 拷贝/μL）结果：Ct 值<30，有明显指数增长，呈典型的 S 型曲线。
阴性对照结果：Ct 值>40 或无 Ct 值，无明显指数增长期和平台期。
样本检测结果：Ct 值<35，有明显指数增长，表明样本中检测出登革热病毒，结果为阳性；Ct 值>40 或无 Ct 值，表明样本中未检测出登革热病毒，结果为阴性；Ct 值在35-40 范围，应对样本进行复检，如重复实验结果 Ct 值仍在 35-40 范围，熔解曲线的峰值与阳性对照相同，则该样本判断为阳性；若不相同，熔解 Tm 值与目的扩增片段 Tm值相差≥2℃，则为非特异性扩增，该样本判断为阴性。
