组织活性氧检测试剂盒（ROS）-深红色荧光

检测原理

探针特性：试剂盒采用新型深红色荧光探针 O19，其最大激发波长为 658 nm，最大发射波长为 676 nm。

检测机制：在组织中存在活性氧的条件下，探针被氧化生成深红色荧光物质，且荧光强度与组织内活性氧水平成正比，通过检测荧光强度即可反映活性氧水平。

检测方法与设备

检测设备：需在激发波长 658 nm、发射波长 676 nm 附近，使用荧光酶标仪、荧光分光光度计等设备检测 O19 产物的荧光强度。

结果解读：荧光强度越大，表明样本中活性氧水平越高，可用于分析干预措施（如养分缺失、药物治疗、遗传基因操控等）对活性氧变化的影响。

适用范围与样本要求

适用样本：可用于各种动物样本的总活性氧快速定性检测。

样本建议：

优先使用新鲜组织样本，能真实反映组织当时的活性氧状态。

冻存组织样本的活性氧（ROS）会在长期冻存中损失，若使用冻存样本，仅能检测残余 ROS，建议尽量避免长期冻存样本。

产品规格与探针选择

检测容量：以每个组织样本 50-100 mg 计，小包装可检测 100 个样本。

探针颜色多样性：O 系列活性氧探针提供多种颜色选择（深红色、绿色、蓝色、红色等），支持多色标记实验。

存储：2-8℃保存，如果长期不用，匀浆液2-8℃保存，探针-20℃避光保存

有效期：未拆封一年，拆封请尽快使用完

扩展产品与服务

活性氧 / 活性氮检测：涵盖细胞、切片、组织样本，可检测总活性氧、总活性氮及各亚型，提供多种荧光颜色试剂盒。

细胞分析试剂盒：雅吉生物提供数百种细胞检测产品，包括细胞凋亡、增殖、毒性、氧化应激、代谢等多个方向。

该试剂盒为活性氧相关研究提供了便捷、高效的检测工具，尤其适用于快速分析干预措施对组织活性氧水平的影响，结合多样的探针选择和扩展产品，可满足不同实验设计需求。 

产品组成：

自备材料：

仪器：需准备荧光光度计或荧光酶标仪、离心机、移液器、冰箱、冰盒。

试剂：包括 PBS 缓冲液、蛋白定量试剂盒。

耗材：有离心管、吸头、一次性手套、荧光专用黑色 96 孔板。

注意事项:

1.探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

2.探针为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

4.试剂拆封后请尽快使用完

使用方法:

试剂准备：

根据样本数量，用纯水将O19探针10倍稀释，现配现用，充分混匀，备用。

样本处理：

1. 刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。

2. 准确称取50 mg或100 mg组织样本，加入500 μl - 1 ml检测缓冲液A，用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

样本检测：

1. 在96孔板中加入195微升匀浆上清液、5微升O19探针，用移液器吹打，使之充分混匀。

注：不同样本的活性氧差异较大，需要根据预实验结果调整探针用量。一般加入2-10μ探针，染色终浓度按试剂盒中探针母液的200-1000倍稀释，200倍稀释适合大多数样本。如果荧光强度太强，超过了检测仪器的量程，可以减少探针用量。保证所有样本探针用量一致即可。以酶标仪检测为例。也可以用荧光分光光度计检测，根据所使用仪器决定匀浆液体积和染色容器。

2. 在37℃避光孵育20-30分钟。

3. 置于酶标仪中，后于激发波长为658 nm、发射波长676 nm检测荧光强度。

注：必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。如果荧光强度太强，超过了仪器的检测范围，可以将孵育后的匀浆上清液用纯水稀释后再检测。一般稀释5-50倍。保证所有样本稀释倍数一致即可。

蛋白定量：

1. 另取50微升上清匀浆液，用PBS大约稀释20-30倍。

2. 取100微升进行蛋白定量，测定蛋白浓度（mg/ml）。

结果处理：

以荧光强度（RFU）/蛋白浓度（毫克蛋白）表示组织活性氧强度。

【注】:

l 数据与蛋白浓度的单位无关。

l 此处以蛋白浓度数据作为校正系数，对不同样品进行均一化。

l 荧光强度强则活性氧（ROS）含量高。

l 可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准，待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较活性氧（ROS）程度差异。

使用注意事项:

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.O19探针染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。

常见问题分析：

1.活性氧结果如何分析？

ROS是多种物质的统称，不像某一单一活性氧指标，无法检测其绝对的含量，只能通过设置参照样本，以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化，这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的，也是没有单位的，因为它本质上是一个比值（目标/参照）。反映的是模型样本通过具体的干预措施（如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等）如何影响其ROS的变化，测定其ROS是增加或者降低了。

2.背景荧光比较高？

在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，荧光随时间的逐渐增加可能是来自自发水解，导致水解的原因可能与大气氧化或光诱导氧化有关。

3.荧光强度在变化？

可以观察到荧光的逐渐增加（由于自动氧化）或减少（由于细胞中的染料损失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康的未经处理的样本中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。

注意检测时平行操作即可。

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