使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
3.FDA母液极易水解,建议分装保存,分装后用封口膜密封管口,再用锡箔纸包裹,最后和干燥剂一起用塑料袋密封,≦-20℃冷冻保存。
4.冬天气温较低时FDA溶解液会凝固,可先在37℃水浴至溶解液完全融解后再进行配制,配制过程中注意避免溶液凝固,保持温度至FDA溶解完全。
5.FDA工作液应现配现用,不能提前配制,因为FDA吸水会分解,影响染色效果。
6.FDA易被水解,在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。
7.FDA标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞,最佳标记时间需自行摸索。正式实验前,建议先做几个孔摸索染色浓度和加入FDA试剂后的培养时间。
8.荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9.以下实验步骤仅供参考,请根据实际的实验方案设计或参考相关文献为准。
10.必须设置全阴,FDA单标,PI单标的靶细胞的参照以设置流式。
11.可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的最佳工作浓度。1) 用0.1%皂素或者0.1-0.5%地高辛孵育细胞10min,或者用70%乙醇孵育细胞30min,从而制备死细胞;2) 用50倍-100倍稀释(试剂盒中的母液)的PI溶液进行死细胞染色,以得到仅仅对细胞核染色,而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。3) 用5000倍-500倍稀释(试剂盒中的母液)的FDA进行死细胞染色,以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色,去观察是否活细胞能被染色。