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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 96T | ￥ 1800 | 10 |
人β2转铁蛋白(β2TF) 检测试剂盒
酶联免疫法 说明书
货号：YS06639B
线性范围：31.25-500 ng/mL
1. 预期用途
本试剂盒用于定量检测血清、血浆、细胞上清样本中的β2转铁蛋白(β2TF)，仅供研究使用。
2. 检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法原理：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及校准品中待测物，加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗，结合形成“抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物，加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。
3. 包含的实验材料实验材料
| 名 称 Label | 组成成分 Kit Components | 数量（48T） Quantity | 数量（96T） Quantity |
| 校准品 | 6支不同浓度校准品 | 1支×0.3mL | 1支×0.3mL |
| 酶标板 | 预包被捕获抗体酶标板 | 8×6条 | 8×12条 |
| 酶标记物 | HRP标记检测抗体 | 1瓶×5mL | 1瓶×10mL |
| 样品稀释液 | PBs、BSA、防腐剂等 | 1瓶×5mL | 1瓶×10mL |
| 浓缩洗液（20×） | 20倍浓缩洗液 | 1瓶×15mL | 1瓶×25mL |
| 显色剂A | 过氧化氢 | 1瓶×3mL | 1瓶×6mL |
| 显色剂B | TMB | 1瓶×3mL | 1瓶×6mL |
| 终止液 | 终止液 | 1瓶×3mL | 1瓶×6mL |
| 封板膜 | / | 1张 | 2张 |
| 说明书 | / | 1份 | 1份 |
如需单独采购通用型组分，请提供对应的货号。
各校准品浓度为
| S5 | S4 | S3 | S2 | S1 | S0 |
| 500ng/mL | 250ng/mL | 125ng/mL | 62.5ng/mL | 31.25ng/mL | 0ng/mL |
4. 需要但未包含的实验材料
· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套枪头；
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
5. 试剂的准备及储存
· 试剂盒各组分应储存于2~8℃；
· 使用前请确保试剂盒按规定的条件储存，每次实验仅准备所需实验用量的试剂
· 1×洗液的配制：（20×）浓缩洗液如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。配制好的洗液可以在2~8℃保存1周；
6. 样品采集、处理及储存
· 本试剂检测样品为血清或血浆，含有EDTA抗凝剂的样本可以用于检测。柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样本应做预实验评估影响。
· 标本采集后尽早尽快进行实验，若不能立即进行试验，应于-20℃保存，避免反复冻融。
· 样本不能有微生物污染、应澄清无颗粒物或明显杂质。
· 不能检测含NaN3、悬浮纤维蛋白或重度溶血的样品。
7. 实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
| 1 | 编号 | 检测试验需设置空白孔、校准品孔、样品孔，应合理规划各样本的编号。 |
| 2 | 稀释 加样 加酶 | 空白孔：不加样品及酶标试剂，其余步骤与校准品孔和样品孔相同。 校准品孔：每孔加入校准品50uL（S0-S5）。 血清样品孔：每孔加入样品稀释液40uL，再加入样品10uL*（稀释5倍） 细胞上清样品孔：每孔加入细胞上清50uL，再加入酶标抗体100uL。 加酶：除空白孔外每孔加入100μL酶标记物工作液。 |
| 3 | 温育 | 盖上封板膜，在37℃下孵育60分钟 |
| 4 | 洗板 | 洗板5次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。 |
| 5 | 显色 | 每孔加入显色剂A、显色剂B各50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟（包含空白孔）。 |
| 6 | 终止 | 每孔加终止液 50uL。 |
| 7 | 测定 | 使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值，如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高，应立即在405/630nm双波长条件下检测。 |
* 如检测结果偏低，可适当减小样本稀释倍数。
8. 结果计算
双波长检测结果无需进行调，直接进行标曲拟合及结果计算。
单波长检测结果使用空白孔OD值调0后进行标曲拟合及结果计算。
以下曲线拟合方式均可使用，选择拟合后r值最佳的拟合方式进行校准曲线拟合并计算结果。
l 四参数逻辑（4-P）曲线拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；
l 多项式曲线拟合：2次多项式、3次多项式；
l 双对数直线拟合：以浓度值取对数，吸光度值取对数后，进行直线拟合；
l 点对点线性插值拟合：各相邻点之间分别单独进行线性拟合，分段计算；
推荐使用专业化软件进行结果拟合和计算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。
**最终样本浓度应乘上样本的稀释倍数。
曲线拟合方式示例图，以下数据和曲线仅供示例，与本试剂盒测定结果无关。
9. 检测的局限性
样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。
样本浓度低于LOQ定量限时，检测结果无法进行准确定量。
最高结果上限为：最高浓度校准品×样本稀释倍数。
最低结果下限为：LoQ×样本稀释倍数
10. 产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
灵敏度：20.1 pg/mL。
精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为10μg/mL测定，没有观察到明显的交叉反应。
11. 注意事项
· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！
· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。
· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。
12. 技术要点
· 不同批次的试剂盒不能混用，不建议将不同板上的微孔板条组装在一块板上检测，尽管是同一批次试剂，也可能存在板与板之间的差异。
· 每次实验时应当始终配制标准曲线平行检测，不能将上一次的标准曲线用于下一次实验结果的计算。
· 不要使用超过有效期的试剂盒进行检测。
· 底物显色剂应当为无色，如变蓝表明已变质，不能应用于实验。
· 使用适当的封板膜密封微孔板条，以便检测结果更加可靠。
· 操作时尽量避免产生气泡。不要将不同试剂瓶的瓶盖交叉使用。
· 应当遵循说明书的操作进行实验，不按照说明书的操作将导致实验结果的变化，任何不遵循说明书的实验操作应当事先询问售后技术支持的建议。否则我们不保证实验结果的可靠。
