永生化虹鳟鱼心脏细胞RTH是通过SV40大T抗原基因转染技术建立的鱼类心脏细胞系，来源于健康虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）心脏组织。该细胞系保持了心肌细胞的典型形态和部分功能特征，同时具备无限增殖能力，是研究鱼类心血管生理、环境毒理学和水产养殖疾病模型的理想工具。

细胞来源:永生化虹鳟鱼心脏细胞源自健康成年虹鳟鱼心室组织，通过SV40病毒转染技术实现永生化。该技术通过表达SV40大T抗原蛋白，使细胞绕过衰老过程获得无限增殖能力，同时保留了原代细胞的许多生理特性。

生物学特性

生长特性：在适宜条件下倍增时间约为48-72小时

遗传稳定性：经过STR鉴定，遗传背景清晰

功能特性：保留部分心肌细胞特异性标志物表达，如肌钙蛋白和连接蛋白43

应用领域

水产养殖研究：用于研究虹鳟鱼心脏疾病发生机制

环境毒理学：评估水体污染物对鱼类心血管系统的影响

比较医学：作为人类心血管疾病的比较模型

药物筛选：测试水产用药对心脏细胞的毒性

基础研究：研究鱼类心脏细胞生理和分子生物学特性

培养条件

培养基：Leibovitz's L-15培养基（含10%胎牛血清，1%青霉素-链霉素双抗）

培养温度：18-20℃（虹鳟鱼为冷水性鱼类，需低于哺乳动物细胞培养温度）

气相环境：空气（无需CO₂，L-15培养基不含碳酸氢钠缓冲系统）

培养容器：推荐使用经多聚赖氨酸包被的培养瓶/皿以增强贴壁效果

二、细胞收到后处理

培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO₂的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液拧松瓶盖）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO₂孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，

1）对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含8ml完全培养基的新瓶中。

方法二：可选择半换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml完全培养基新瓶中。

b、细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；

3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。

C、细胞复苏：

1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养；第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。

五、售后条款：

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

2）MC/9小鼠肥大细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。 

细胞冻存

准备冻存液：配制冻存液（50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO）

收集细胞：按传代方法收集对数生长期细胞，计数调整至5×10⁶ cells/ml

分装冻存：每支冻存管分装1ml细胞悬液，标记细胞名称、代次和日期

程序降温：使用程序降温盒或逐步降温法（4℃30分钟→-20℃2小时→-80℃过夜）

长期保存：最后转移至液氮气相中长期保存

质量控制

无菌检测：所有批次细胞均经过细菌、真菌和支原体检测，结果为阴性

活力标准：冻存前细胞活力>90%，复苏后活力应>80%

代次控制：建议使用不超过20代的细胞以保证性状稳定

培养要点

温度控制：严格维持18-20℃培养温度，温度过高会加速细胞老化

培养基选择：必须使用Leibovitz's L-15培养基，不适用于CO₂缓冲系统培养基

传代时机：避免过度融合，及时传代可维持细胞最佳状态

消化控制：虹鳟鱼细胞对胰酶敏感，需密切监控消化过程

污染预防：定期检测支原体污染，建议每月进行一次检测

安全警示

本产品仅供科研使用，不适用于人类或临床诊断

操作时应遵守BSL-1实验室安全规范

冻存管从液氮取出时可能有爆裂风险，需佩戴防护面罩和手套，废弃细胞培养物应经消毒处理后按生物危险废物处置