一、细胞背景

永生化人淋巴内皮细胞（HLEC-SV40T）是通过 SV40大T抗原（SV40T） 基因转染原代人淋巴管内皮细胞（LECs）构建的永生化细胞系，解决了原代细胞增殖能力有限（通常仅能传代5-10代）的问题。淋巴管内皮细胞是淋巴管壁的主要结构细胞，参与 体液平衡、免疫调节、炎症反应及肿瘤转移 等生理和病理过程。

• 永生化方法：通常采用 慢病毒转染SV40T基因，抑制p53和Rb通路，使细胞突破增殖限制。

• 应用需求：淋巴管内皮细胞在 肿瘤微环境、免疫调控、淋巴水肿 等研究中至关重要，但原代细胞难以长期培养，永生化细胞提供了稳定的实验模型。

二，细胞详情

1. 基本特性

   • 来源：人淋巴管组织（如淋巴结或胸导管）。

   • 形态：贴壁生长，呈 内皮细胞样（扁平、多边形）。

   • 标志物：

     • CD31（PECAM-1）（阳性，纯度≥90%）。

     • VEGFR-3（FLT4）（淋巴管内皮特异性标志）。

       LYVE-1（淋巴管内皮透明质酸受体）。

2. 功能特性

   • 成管能力：在基质胶（Matrigel）中可形成 淋巴管样结构，用于研究淋巴管生成。

   • 免疫调节：可分泌 CCL21、CXCL12 等趋化因子，介导淋巴细胞归巢。

   • 肿瘤转移模型：与癌细胞共培养可模拟 淋巴道转移（如肝癌HepG-2细胞）。

3. 常见细胞系举例

   细胞系	永生化方法	特点
   HLEC-SV40T	SV40T	保留原代LEC特性，可传代5-10代
   hLECs	SV40T	用于VEGF-C/D促淋巴管生成研究

三、研究前景

1. 肿瘤转移机制

   • 研究 VEGF-C/VEGF-D 促进淋巴管新生及肿瘤细胞侵袭的机制3。

   • 探索 华蟾素注射液 等中药成分抑制肿瘤淋巴转移的效应3。

2. 免疫与炎症调控

   • 分析LECs在 自身免疫病（如类风湿关节炎） 中的作用8。

   • 研究 脑膜淋巴系统（muLEC） 在阿尔茨海默病中的“排污”功能8。

3. 药物筛选与治疗

   • 测试 抗淋巴管生成药物（如重组人血管内皮抑素）的疗效3。

   • 开发 淋巴水肿靶向疗法（如VEGF-C基因治疗）38。

四、培养方法及注意事项

1. 培养基与培养条件

   • 基础培养基：内皮细胞专用培养基（如 Endothelial Cell Medium, ECM）5。

   • 添加物：

     • 10% FBS

     • 1% 青霉素/链霉素

     • 部分需添加 嘌呤霉素（1 μg/mL） 维持SV40T筛选压力1。

   • 培养环境：37℃、5% CO₂，每2-3天换液14。

2. 传代与冻存

   • 消化方法：

     • 使用 Accutase 或低浓度胰酶（0.05% Trypsin-EDTA）17。

     • 消化时间控制在 1-3分钟，避免过度消化导致细胞损伤7。

   • 冻存液：

     • 70%基础培养基 + 20% FBS + 10% DMSO4。

     • 液氮长期保存，避免反复冻融7。

3. 关键注意事项

   • 细胞状态监测：

     • 永生化细胞可能随传代次数增加出现 基因组不稳定，建议在 20代内 使用10。

     • 定期检测 CD31/VEGFR-3 表达，确保功能未丧失1。

   • 污染控制：

     • 严格无菌操作，定期检测 支原体 污染410。

   • 共培养优化：

     • 与肿瘤细胞共培养时，需优化比例（如1:1或1:2）3。

五、总结

HLEC-SV40T细胞是研究 淋巴管生物学、肿瘤转移及免疫调控 的重要工具，其永生化特性解决了原代细胞培养的局限性。未来可结合 3D类器官、CRISPR基因编辑 等技术，进一步探索其在 精准医学 中的应用