产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 1200 | 10 |
| 100T | ￥ 2000 | 10 |
产品简介：
核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类（70S）存在于细菌等原核生物中,另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。雅吉生物细菌核糖体提取试剂盒可用于各种原核细菌样本的核糖体蛋白的提取。 需要用于动物细胞、植物、叶绿体核糖体蛋白提取试剂盒可以联系我们。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容
试剂盒组成：
| 产品组成 | 50T | 100T | YS-31435 |
| 组分A：核糖体提取液A | 50ml | 100ml | 31435A |
| 组分B：核糖体提取液B | 500μL | 1ml | 31435B |
| 组分C：核糖体提取液C | 25ml | 50ml | 31435C |
| 组分D：核糖体蛋白提取液D | 10ml | 20ml | 31435D |
| 组分E：蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 250μL | 31435E |
注：提取液ABCD 2-8℃存储，蛋白酶抑制剂E短期存储2-8也可以，长期或开盖后请于 -20℃保存
蛋白酶抑制剂低温时为固体，恢复室温或37℃短时间水浴后变成液体，可离心至管底后使用
自备材料：
1.离心机、2.振荡器、3.涡旋混匀器、4.移液器、5.冰箱、6.冰盒、7.PBS缓冲液、
8.蛋白定量试剂盒、9.离心管、10.吸头、11.一次性手套
适用样本：细菌
操作步骤(仅供参考)：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 收集对数生长期细菌细胞，离心后尽可能吸干培养基。
3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每500mg湿重菌体中加入1ml冷的试剂 A和10ul冷的试剂 B，充分混匀，置冰上30分钟。
5. 用高压细胞破碎仪或超声细胞破碎仪破碎细胞。
6. 在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心30分钟，弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂C，混匀。
10. 在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。
11. 弃上清，在沉淀中加入50-100ul核糖体蛋白提取液D，充分混匀。
12. 即得到核糖体蛋白样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。
注意事项：
1、 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2、蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3、实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4、蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
6、可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
7、下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
8、细菌核糖体提取的关键是待提取样本的质量，一般来说，最好采用Rnase活性缺失的大肠杆菌样本。细胞最好是对数生长期新鲜收集，或是收集后立即-80保存的样本。
常见事项：
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
细菌核糖体蛋白含量低，在条件允许的情况下，尽可能加大细菌上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
有效期：2-8 ℃避光有效期为一年
注：拆封后请尽快使用，有效期为试剂盒未拆封并严格按要求条件保存的有效期。
