产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 1×10^6cells/T25培养瓶 | ￥ 8500 | 10 |
EBV转化淋巴细胞系带绿色荧光Akata是一种经过EB病毒（Epstein-Barr Virus, EBV）转化的B淋巴细胞系，具有稳定的绿色荧光蛋白（GFP）表达。该细胞系广泛应用于免疫学、病毒学、癌症研究及药物筛选等领域，特别适用于活细胞成像、细胞追踪及细胞间相互作用的研究。
| 细胞传代 | 当细胞密度达到80-90%时，进行传代，传代比例为1:3至1:5 | 冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 |
| 细胞描述 | EBV转化：通过EB病毒转化，细胞具有永生化特性，可在体外长期培养。 绿色荧光标记：细胞稳定表达绿色荧光蛋白（GFP），便于荧光显微镜观察和流式细胞术分析。 高增殖能力：细胞增殖速度快，适合大规模实验需求。 应用广泛：适用于免疫学研究、病毒学实验、癌症机制探索及药物筛选等。 无菌检测：细胞培养物经无菌检测，确保无细菌、真菌及支原体污染。 GFP表达检测：通过流式细胞术检测GFP表达率，确保>90%的细胞表达GFP。 细胞活力检测：通过台盼蓝染色法检测细胞活力，确保细胞活力>90%。 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 | ||
| 培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 | ||
免疫学研究：用于研究B细胞的功能、免疫应答及抗体产生机制。
病毒学研究：用于EB病毒感染机制、潜伏感染及病毒复制的研究。
癌症研究：用于探索B细胞淋巴瘤的发病机制及治疗策略。
药物筛选：用于筛选抗病毒药物、抗癌药物及免疫调节剂。
细胞成像：适用于活细胞成像、细胞追踪及细胞间相互作用的研究。
操作细胞时需遵守无菌操作规范，避免污染。细胞培养过程中需定期更换培养基，保持细胞健康状态。长期培养时，建议定期检测细胞的GFP表达稳定性。
收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
细胞培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：非无血清冻存液方法，无血清冻存液方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。
四：悬浮细胞传代培养
悬浮细胞的传代可通过补加或置换新鲜培养基的方式来完成，
具体做法如下：
1. 取出少量细胞悬液进行细胞计数及活力检测，当细胞密度达到×106
cells/mL 时，进行细胞传代培养。
2. 取足量细胞加入到盛有新鲜培养基的培养瓶中，将细胞密度维持在 ×105cells/mL。
3. 将培养瓶竖直放置于含有5%培养基换液: 每隔 2 至 3 天。
注意：
培养瓶应使用带滤膜瓶盖，以保持培养基中的空气和悬浮细胞传代培养该细胞系培养所用基本培养基为 RPMI1640,配置完全培养基时需加入15%FBS，1%Anti-Anti。
细胞冻存液，请使用产品： Cryo Frozen Medium (Cat#CTCC-002-002)离心收集细胞后，加入适量冻存液（每管细胞冻存量达到10的6次方），将冻存管放入冻存盒置于负80冰箱，24h后将冻存管转入液氮长期保存。
