产品及特点
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistance Staphylococcus
aureus，MRSA）是一种革兰阳性球菌，是引起细菌性食物中毒和院内感染的一 种主要病原菌，是金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的一种。作为一 种潜在的超级细菌，MRSA 几乎对所有β-内酰胺类的抗生素产生了耐药性，该特 性不但增加了治疗的复杂性和难度，也增加了抗生素的消耗量和医疗费用，因此 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速准确鉴定对该病的预防和治疗有着重要作用。 本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测耐甲氧西林金黄 色葡萄球菌的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 DNA 高度保守区设计， 不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品待提取，最好设置 N+2 个提取，多出的是 PC（样品制备阳 性对照）和 NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的 1000 倍稀释液 10μL 再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼
容。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR
管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用 水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模 板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好
四、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值 为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核 酸浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该 小于或等于 38。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小 于或等于 38 则为阳性。如果在 38-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
关联产品
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染料法荧光定量 PCR 试剂盒
