产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 1×10^6cells/T25培养瓶 | ￥ 32000 | 1 |
| 传代方法 | 1:3-1:4，每2-3天换液一次 | 传代周期 | 24-48h |
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细胞描述
| 转导方法：蛋白法 克隆类型：纯合子 细胞鉴定：PCR，测序 细胞冻存或复苏发货 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 | ||
| 细胞备注 | 收到细胞后请务必仔细阅读产品资料，了解细胞相关信息，如贴壁特性 (贴壁/悬浮/半贴壁半悬浮)、细胞形态、培养体系、传代比例和换液频率等。 | ||
目标基因选择：明确需要突变的基因及其具体位点。
突变类型：确定是错义突变、无义突变还是同义突变。
细胞株选择：根据实验需求选择合适的细胞株。
sgRNA设计：针对目标位点设计特异性sgRNA。
质粒构建：将sgRNA和Cas9蛋白编码序列克隆到表达载体中。
细胞转染：将构建好的质粒转入目标细胞株。
突变筛选：通过抗生素筛选或荧光标记分离转染成功的细胞。
单克隆培养：将筛选后的细胞进行单克隆培养。
基因型鉴定：通过PCR和测序验证突变。
CRISPR-Cas9技术：高效、精准的基因编辑工具。
T7E1 assay：初步检测突变效率。
Sanger测序：确认突变位点和类型。
Western Blot：检测突变对蛋白表达的影响。
脱靶效应：设计sgRNA时需考虑脱靶风险，使用预测软件评估。
细胞状态：确保细胞健康，避免因状态不佳影响实验结果。
对照设置：设置未转染和空载体转染的对照组。
实验重复：至少进行三次独立实验以确保结果可靠。
伦理审查：涉及人类细胞或动物实验时，需通过伦理审查。
