上海细胞库
人源细胞系| 稳转细胞系| 基因敲除株| 基因点突变细胞株| 基因过表达细胞株| 重组细胞系| 猪的细胞系| 马细胞系| 兔的细胞系| 犬的细胞系| 山羊的细胞系| 鱼的细胞系| 猴的细胞系| 仓鼠的细胞系| 狗的细胞系| 牛的细胞| 大鼠细胞系| 小鼠细胞系| 其他细胞系|
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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 1×10^6cells/T25培养瓶 | ￥ 3500 | 1 |
一、细胞培养条件
| 培养条件 | 空气，95%；CO2，5% ；37℃ | ||
| 倍增时间 | ~24-30小时 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
| 细胞背景 | 该细胞是由Lozzio从一名53岁的慢性髓细胞性白血病急变期的女性患者的胸水中分离建立的。该细胞曾被认为来源于粒系，处于高度未分化阶段；Anderson等人作了细胞膜特性的研究后，认为该细胞是红白血病细胞系。该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标，故而被广泛应用于这方面的研究。K562的原始细胞是一种具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞，能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。 | ||
| 传代方法 | 第一次建议1:2传代 | 传代情况 | 2天换液 |
| 备注 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 | ||
人慢性髓系白血病细胞带荧光素酶；K562/LUC 细胞筛选：
该细胞为已经稳定转染LUC的细胞，随细胞传代次数的增加，其LUC荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
细胞经过20μg/ml嘌呤霉素筛选，平时培养可维持10μg/ml嘌呤霉素
二、细胞收货后处理
1) 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2) 离心管直接在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞后，根据离心后的沉淀量进行传代，转移至T25培养瓶中后，请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞：传代时使用【半换液法】对细胞状态有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代，刚收到细胞时建议1:2传代较为合适。
4) 备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
A、复苏细胞处理方法：培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，严格无菌后将细胞瓶放置培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态。静置后显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。
B、冻存细胞处理方法：收到细胞后，观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好无损是否有解冻情况，若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻破损现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。复苏第一管如有活性问题，请及时联系我们，技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管，未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代：如细胞密度超80%，即可进行传代培养，步骤如下：
1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置培养箱中消化 1-2min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化；
3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000 rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀；
4) 按8mL每瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含8 mL完全培养基的6cm培养皿中或者T25培养瓶中，间隔3-4天观察细胞状态换液或传代。
（即1个T25瓶传代接种至2个T25瓶或者2个8cm的培养皿）
b、细胞冻存：细胞收集参照传代步骤，按冻存数量（推荐每支冻存管5×106左右细胞数量冻存），加入1ml的我司无血清冻存液（货号：C7001），轻轻混匀后，放-80℃冰箱，24小时后转入液氮罐中。
C、细胞复苏：从液氮灌或-80℃冰箱中找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃。
1) 将冻存细胞在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2) 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000 rpm离心5min；
3) 弃去上清液，补加5mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中或6cm皿中，培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。
四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中细胞容易脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5-8min，收集上清作过渡培养，沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-6ml/瓶，最后放入细胞培养箱中培养。
