上海细胞库
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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 1×10^6cells/T25培养瓶 | ￥ 15800 | 1 |
细胞系: Huh-7
基因: hRFX1 (Human Regulatory Factor X1)
功能: hRFX1基因编码一个转录因子，参与调控多种基因的表达，尤其在免疫反应和细胞周期调控中起重要作用。
应用: 该基因敲除株可用于研究hRFX1在肝癌、免疫调节、细胞周期调控等方面的功能。
技术: CRISPR/Cas9基因编辑技术
载体: 使用慢病毒载体进行基因敲除
转导步骤:
设计并合成针对hRFX1基因的sgRNA。
将sgRNA和Cas9蛋白导入Huh-7细胞。
通过抗生素筛选获得稳定敲除hRFX1的细胞株。
通过测序和Western blot验证敲除效果。
修饰类型: 基因敲除
测序分析: 通过Sanger测序确认hRFX1基因的敲除。
蛋白表达检测: 使用Western blot检测hRFX1蛋白的表达水平，确认敲除效果。
细胞活力检测: 通过MTT assay检测细胞活力，确保敲除后细胞仍保持正常生长状态。
无菌检测: 确保细胞无细菌、真菌和支原体污染。
肝癌研究: Huh-7细胞系来源于肝癌组织，hRFX1基因敲除株可用于研究hRFX1在肝癌发生、发展中的作用。
免疫调节: hRFX1在免疫反应中起重要作用，敲除株可用于研究其在免疫调节中的功能。
细胞周期调控: hRFX1参与细胞周期调控，敲除株可用于研究其在细胞周期中的具体作用机制。
Huh-7细胞hRFX1基因敲除株是通过CRISPR/Cas9技术构建的稳定敲除hRFX1基因的细胞株，适用于肝癌、免疫调节和细胞周期调控等领域的研究。通过严格的质控检测，确保敲除效果和细胞质量，为相关研究提供可靠的实验材料。
修饰类型: 基因敲除
修饰基因: hRFX1
质量检测测序分析: 通过Sanger测序确认hRFX1基因的敲除。
蛋白表达检测: 使用Western blot检测hRFX1蛋白的表达水平，确认敲除效果。
细胞活力检测: 通过MTT assay检测细胞活力，确保敲除后细胞仍保持正常生长状态。
无菌检测: 确保细胞无细菌、真菌和支原体污染。
肝癌研究: Huh-7细胞系来源于肝癌组织，hRFX1基因敲除株可用于研究hRFX1在肝癌发生、发展中的作用。
免疫调节: hRFX1在免疫反应中起重要作用，敲除株可用于研究其在免疫调节中的功能。
细胞周期调控: hRFX1参与细胞周期调控，敲除株可用于研究其在细胞周期中的具体作用机制。
Huh-7细胞hRFX1基因敲除株是通过CRISPR/Cas9技术构建的稳定敲除hRFX1基因的细胞株，适用于肝癌、免疫调节和细胞周期调控等领域的研究。通过严格的质控检测，确保敲除效果和细胞质量，为相关研究提供可靠的实验材料。
细胞接收后处理方法
一，冻存管运输方式
1.请在收到细胞后，先检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损等情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。
2.收到细胞后如不立即进行实验，则请将细胞放至-80℃或液氮中保存。
3. 实验前开启水浴锅并预热培养基，并备好15mL离心管加入5mL预热后的培养基。
4.将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。
5.将冻存管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。使用1 mL培养基清洗冻存管内壁，一并收集至15mL离心管内。
6. 250g离心5min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入2mL完全培养基重悬。
7.取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。
8. 将重悬后的细胞接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。
9. 24h后镜下拍照并反馈我们，换液后继续培养。
二，培养瓶（贴壁细胞）运输方式：
1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。
2. 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，并将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于培养箱内放置2-3h，让脱壁的细胞可以重新贴附。
2.小心开盖移去瓶内的培养基，更换为细胞专用的完全培养基，按照培养器皿决定用量。若细胞脱壁过多，可将原培养基离心获得细胞沉淀，再接种回原瓶内。
2.镜下拍照并反馈我们，如细胞汇合度较低，则放置于培养箱内进行培养。如细胞汇合度达到80%以上，则可按照常规方法进行消化传代。
三.运输方式：培养瓶（悬浮细胞）
1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。
2. 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，拍照并反馈我们。
3.将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于超净工作台内小心开盖。将瓶内的培养基全部转移至若干50 mL离心管内，并清洗培养瓶内壁一并收集。
4. 250g离心5min收集细胞沉淀，弃掉上清，使用新鲜的完全培养基重悬至合适密度。接种至合适的培养器皿中，置于培养箱内培养。
5. 培养24h后观察细胞状态和密度，按照常规方法进行传代。
四，运输方式：血清管
1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。
2. 收到细胞后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。
3. 血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。
4. 将血清管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。
5. 吸取1mL 培养基清洗血清管内壁，同样转移至15mL管，并吹打均匀。
6. 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。
7. 250g离心5min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。
8. 24h后镜下拍照并反馈我们，并根据汇合度继续培养或消化传代。
五.运输方式：
1.Huh-7细胞hRFX1基因敲除株冻存管和Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后，先检查真空包装袋内的“细胞胶囊”管身是否完好，培养液是否外渗，并核对管身上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。
2. 收到Huh-7细胞hRFX1基因敲除株后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24 h内完成实验，否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。“细胞胶囊”管内的培养液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。
3.用75%酒精消毒包装袋表面，在超净台内取出细胞胶囊管和Buffer管，小心的打开细胞胶囊管盖，尽量避免气泡溢出。
4. 使用移液枪将细胞胶囊管中的培养液全部弃去。
5. 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中，拧紧管盖，上下颠倒3-5 min。
6. 观察到细胞胶囊完全溶解后，小心开盖，使用移液枪轻柔吹打数次，转移到15 mL离心管内。
7.取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。
8. 250 g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种到合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。
9. 24 h 后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应尽量清晰，并根据汇合度继续培养或消化传代。
