一. 背景资料

• 细胞系: K562细胞是一种人慢性髓性白血病（CML）细胞系，源自一名53岁女性患者的胸水。该细胞系具有高度的增殖能力和多能性，常用于白血病研究、药物筛选和基因功能研究。

• MYC基因: MYC基因编码一种转录因子，参与细胞增殖、分化、代谢和凋亡等过程的调控。MYC的异常表达与多种癌症的发生和发展密切相关，包括白血病、淋巴瘤和实体瘤。

二. 转导方法

• CRISPR/Cas9技术: 使用CRISPR/Cas9系统对K562细胞中的MYC基因进行敲除。通过设计特异性sgRNA靶向MYC基因的外显子区域，Cas9核酸酶在靶位点引入双链断裂，随后通过非同源末端连接（NHEJ）修复机制导致基因敲除。

• 转导载体: 使用慢病毒或质粒载体将CRISPR/Cas9组件导入K562细胞。

三. 修饰类型

• 基因敲除: MYC基因的完全敲除，导致MYC蛋白表达缺失。

• 单克隆筛选: 通过有限稀释法获得单克隆细胞株，确保基因敲除的均一性。

四. 修饰基因

• 目标基因: MYC（c-Myc）

• 基因ID: 4609

• 染色体位置: 8q24.21

五. 质量检测

• 基因敲除验证: 通过PCR和测序验证MYC基因的敲除情况。

• 蛋白表达检测: 使用Western Blot检测MYC蛋白的表达水平，确认敲除效果。

• 细胞活力检测: 通过MTT或CCK-8 assay检测细胞增殖能力的变化。

• 细胞形态观察: 观察细胞形态学变化，评估基因敲除对细胞表型的影响。

六. 疾病特征

• 白血病模型: K562细胞是研究慢性髓性白血病（CML）的常用模型，MYC基因敲除后可用于研究MYC在白血病发生和发展中的作用。

• 药物筛选: MYC敲除株可用于筛选靶向MYC或相关信号通路的抗癌药物。

• 基因功能研究: 通过比较野生型和MYC敲除株的差异，研究MYC在细胞增殖、凋亡、代谢等过程中的功能。

总结

K562细胞Human MYC基因敲除株是通过CRISPR/Cas9技术构建的基因敲除模型，适用于白血病研究、药物筛选和基因功能研究。该细胞株经过严格的质量检测，确保MYC基因的完全敲除和细胞功能的稳定性。

细胞接收后处理方法

一，冻存管运输方式

1.请在收到细胞后，先检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损等情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2.收到细胞后如不立即进行实验，则请将细胞放至-80℃或液氮中保存。

3. 实验前开启水浴锅并预热培养基，并备好15mL离心管加入5mL预热后的培养基。

4.将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。

5.将冻存管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。使用1 mL培养基清洗冻存管内壁，一并收集至15mL离心管内。

6. 250g离心5min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入2mL完全培养基重悬。

7.取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

8. 将重悬后的细胞接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

9. 24h后镜下拍照并反馈我们，换液后继续培养。

二，培养瓶（贴壁细胞）运输方式：

1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2. 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，并将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于培养箱内放置2-3h，让脱壁的细胞可以重新贴附。

2.小心开盖移去瓶内的培养基，更换为细胞专用的完全培养基，按照培养器皿决定用量。若细胞脱壁过多，可将原培养基离心获得细胞沉淀，再接种回原瓶内。

2.镜下拍照并反馈我们，如细胞汇合度较低，则放置于培养箱内进行培养。如细胞汇合度达到80%以上，则可按照常规方法进行消化传代。

三.运输方式：培养瓶（悬浮细胞）

1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2. 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，拍照并反馈我们。

3.将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于超净工作台内小心开盖。将瓶内的培养基全部转移至若干50 mL离心管内，并清洗培养瓶内壁一并收集。

4. 250g离心5min收集细胞沉淀，弃掉上清，使用新鲜的完全培养基重悬至合适密度。接种至合适的培养器皿中，置于培养箱内培养。

5. 培养24h后观察细胞状态和密度，按照常规方法进行传代。

四，运输方式：血清管

1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2. 收到细胞后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。

3. 血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

4. 将血清管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。

5. 吸取1mL 培养基清洗血清管内壁，同样转移至15mL管，并吹打均匀。

6. 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

7. 250g离心5min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

8. 24h后镜下拍照并反馈我们，并根据汇合度继续培养或消化传代。

五.运输方式：

1.K562细胞human MYC基因敲除株管和Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后，先检查真空包装袋内的“细胞胶囊”管身是否完好，培养液是否外渗，并核对管身上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2.   收到K562细胞human MYC基因敲除株后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24 h内完成实验，否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。“细胞胶囊”管内的培养液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

3.用75%酒精消毒包装袋表面，在超净台内取出细胞胶囊管和Buffer管，小心的打开细胞胶囊管盖，尽量避免气泡溢出。

4. 使用移液枪将细胞胶囊管中的培养液全部弃去。

5. 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中，拧紧管盖，上下颠倒3-5 min。

6. 观察到细胞胶囊完全溶解后，小心开盖，使用移液枪轻柔吹打数次，转移到15 mL离心管内。

7.取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。

8. 250 g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种到合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

9. 24 h 后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应尽量清晰，并根据汇合度继续培养或消化传代。