产品名称: HepG2细胞human IDUA基因敲除株

细胞类型: 人肝癌细胞系（HepG2）
基因敲除: IDUA基因（α-L-艾杜糖苷酸酶基因）
应用领域: 溶酶体贮积症研究、基因功能研究、药物筛选

背景资料

HepG2细胞:
HepG2是一种人肝癌细胞系，常用于肝脏相关疾病的研究，包括代谢疾病、药物代谢和毒理学研究。该细胞系保留了部分肝细胞的功能特性，如糖原储存和胆固醇代谢。

IDUA基因:
IDUA基因编码α-L-艾杜糖苷酸酶（α-L-iduronidase），该酶参与糖胺聚糖（GAGs）的降解。IDUA基因突变会导致溶酶体贮积症中的一种——粘多糖贮积症I型（MPS I），也称为Hurler综合征。MPS I患者由于IDUA酶活性缺失，导致GAGs在溶酶体中积累，引发多系统功能障碍。

转导方法

CRISPR/Cas9技术:
使用CRISPR/Cas9基因编辑技术对HepG2细胞中的IDUA基因进行敲除。具体步骤如下：

1. 设计针对IDUA基因的特异性sgRNA（单链引导RNA）。

2. 将sgRNA与Cas9蛋白共同转染至HepG2细胞中。

3. 通过同源定向修复（HDR）或非同源末端连接（NHEJ）机制敲除IDUA基因。

4. 筛选并验证敲除成功的单克隆细胞株。

修饰类型

基因敲除:
IDUA基因的完全敲除，导致α-L-艾杜糖苷酸酶功能丧失。

修饰基因

目标基因: IDUA（α-L-艾杜糖苷酸酶基因）
基因位置: 人类染色体4p16.3
基因功能: 编码α-L-艾杜糖苷酸酶，参与糖胺聚糖的降解。

质量检测

1. 基因敲除验证:

   • 通过PCR和测序确认IDUA基因的敲除。

   • Western Blot检测α-L-艾杜糖苷酸酶蛋白表达缺失。

2. 细胞活力检测:

   • 使用MTT或CCK-8试剂检测细胞增殖能力，确保敲除后细胞活力正常。

3. 功能验证:

   • 检测细胞内糖胺聚糖（GAGs）的积累情况，验证IDUA基因敲除的功能性影响。

4. 无菌检测:

   • 确保细胞无细菌、真菌和支原体污染。

疾病特征

粘多糖贮积症I型（MPS I）:

• 病因: IDUA基因突变导致α-L-艾杜糖苷酸酶活性缺失。

• 病理特征: 糖胺聚糖（GAGs）在溶酶体中积累，影响细胞功能。

• 临床表现:

  • 骨骼发育异常（如多发性骨发育不良）

  • 肝脾肿大

  • 心脏瓣膜病变

  • 神经系统退化（智力障碍、视力听力受损）

  • 呼吸道阻塞

HepG2 IDUA敲除株的应用:

• 用于研究MPS I的病理机制。

• 作为药物筛选模型，评估酶替代疗法（ERT）或基因疗法的效果。

• 研究糖胺聚糖代谢异常对肝脏功能的影响。

总结

HepG2 IDUA基因敲除株是一种重要的研究工具，适用于溶酶体贮积症（特别是MPS I）的病理机制研究、药物筛选和基因治疗开发。通过CRISPR/Cas9技术实现的IDUA基因敲除，能够模拟MPS I的疾病特征，为相关研究提供可靠的细胞模型。

细胞接收后处理方法

一，冻存管运输方式

1.请在收到细胞后，先检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损等情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2.收到细胞后如不立即进行实验，则请将细胞放至-80℃或液氮中保存。

3. 实验前开启水浴锅并预热培养基，并备好15mL离心管加入5mL预热后的培养基。

4.将冻存管置于37℃水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。

5.将冻存管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。使用1 mL培养基清洗冻存管内壁，一并收集至15mL离心管内。

6. 250g离心5min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入2mL完全培养基重悬。

7.取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

8. 将重悬后的细胞接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

9. 24h后镜下拍照并反馈我们，换液后继续培养。

二，培养瓶（贴壁细胞）运输方式：

1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2. 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，并将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于培养箱内放置2-3h，让脱壁的细胞可以重新贴附。

2.小心开盖移去瓶内的培养基，更换为细胞专用的完全培养基，按照培养器皿决定用量。若细胞脱壁过多，可将原培养基离心获得细胞沉淀，再接种回原瓶内。

2.镜下拍照并反馈我们，如细胞汇合度较低，则放置于培养箱内进行培养。如细胞汇合度达到80%以上，则可按照常规方法进行消化传代。

三.运输方式：培养瓶（悬浮细胞）

1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞瓶上的标签信息，细胞瓶数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2. 观察瓶内的培养基是否澄清，镜下观察细胞是否状态良好，拍照并反馈我们。

3.将细胞容器外壁进行常规消毒后，置于超净工作台内小心开盖。将瓶内的培养基全部转移至若干50 mL离心管内，并清洗培养瓶内壁一并收集。

4. 250g离心5min收集细胞沉淀，弃掉上清，使用新鲜的完全培养基重悬至合适密度。接种至合适的培养器皿中，置于培养箱内培养。

5. 培养24h后观察细胞状态和密度，按照常规方法进行传代。

四，运输方式：血清管

1. 请在收到细胞后，先检查包装是否完整，有无破损漏液的情况，并核对细胞管上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2. 收到细胞后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24h内完成实验。否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。

3. 血清管悬液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

4. 将血清管外壁进行常规消毒后，在超净台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至15mL离心管内。

5. 吸取1mL 培养基清洗血清管内壁，同样转移至15mL管，并吹打均匀。

6. 取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系，如无台盼蓝，可略过该步骤。

7. 250g离心5min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

8. 24h后镜下拍照并反馈我们，并根据汇合度继续培养或消化传代。

五.运输方式：

1.MHCC97H细胞human KLF4基因敲除株冻存管和Buffer共2个试剂管。请在收到细胞后，先检查真空包装袋内的“细胞胶囊”管身是否完好，培养液是否外渗，并核对管身上的标签信息，细胞管数是否与发货清单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。

2.   收到MHCC97H细胞human KLF4基因敲除株后请尽快进行实验，如不能及时处理，请将细胞放至常温环境，通常15-25℃为佳，并尽量在24 h内完成实验，否则细胞状态和存活率将会受到一定的影响。“细胞胶囊”管内的培养液可能会呈现一定程度的浑浊状态，这属于正常现象，请放心操作。

3.用75%酒精消毒包装袋表面，在超净台内取出细胞胶囊管和Buffer管，小心的打开细胞胶囊管盖，尽量避免气泡溢出。

4. 使用移液枪将细胞胶囊管中的培养液全部弃去。

5. 将Buffer全部加入到细胞胶囊管中，拧紧管盖，上下颠倒3-5 min。

6. 观察到细胞胶囊完全溶解后，小心开盖，使用移液枪轻柔吹打数次，转移到15 mL离心管内。

7.取20μL细胞悬液至EP管，台盼蓝染色并计数，记录细胞数量和存活率。如有异常请及时与我们联系。

8. 250 g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种到合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。

9. 24 h 后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应尽量清晰，并根据汇合度继续培养或消化传代。