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产品描述: BaF3-EGFR-T790M-C797S稳转细胞系是一种经过基因工程改造的BaF3细胞系,稳定表达EGFR T790M和C797S双突变体。该细胞系广泛应用于EGFR抑制剂的研究,特别是针对第三代EGFR抑制剂(如奥希替尼)耐药机制的研究。
应用领域:
EGFR抑制剂耐药机制研究药物筛选与药效评估肿瘤生物学研究
1. 细胞复苏
从液氮罐中取出冻存的BaF3-EGFR-T790M-C797S细胞,迅速放入37°C水浴中解冻。
解冻后,将细胞悬液转移至15 mL离心管中,加入10 mL预热的完全培养基(RPMI 1640 + 10% FBS + 1% Penicillin-Streptomycin)。
轻轻混匀后,1000 rpm离心5分钟,弃上清。
用10 mL完全培养基重悬细胞,转移至T25培养瓶中,置于37°C、5% CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代
当细胞密度达到1-2×10^6 cells/mL时,进行传代。
取适量细胞悬液,按1:5至1:10的比例稀释至新鲜完全培养基中,继续培养。
3. 细胞冻存
收集对数生长期的细胞,1000 rpm离心5分钟,弃上清。
用冻存液(90% FBS + 10% DMSO)重悬细胞,调整细胞密度至1-5×10^6 cells/mL。
分装至冻存管中,标记好细胞名称、日期等信息。
将冻存管放入程序降温盒中,置于-80°C冰箱过夜,次日转移至液氮罐中长期保存。
细胞培养条件: BaF3-EGFR-T790M-C797S细胞系需在37°C、5% CO2的培养箱中培养,使用RPMI 1640完全培养基。
细胞密度: 保持细胞密度在1-2×10^6 cells/mL,避免过度生长导致细胞状态下降。
冻存与复苏: 冻存和复苏过程中需严格控制温度变化,避免细胞损伤。
无菌操作: 所有操作需在无菌条件下进行,避免细胞污染。
细胞来源: BaF3细胞系是一种小鼠前B细胞系,经过基因工程改造后稳定表达EGFR T790M和C797S双突变体。
EGFR突变:
T790M: 位于EGFR激酶域的耐药突变,常见于第一代EGFR抑制剂耐药患者。
C797S: 位于EGFR激酶域的另一个耐药突变,常见于第三代EGFR抑制剂(如奥希替尼)耐药患者。
应用背景: EGFR T790M和C797S双突变体是EGFR抑制剂耐药的重要机制之一。BaF3-EGFR-T790M-C797S稳转细胞系为研究这些耐药机制提供了重要的工具,特别是在药物筛选和耐药机制研究中具有重要应用价值。
参考文献:
相关文献1: 研究EGFR T790M和C797S双突变体在EGFR抑制剂耐药中的作用。
相关文献2: 使用BaF3细胞系进行药物筛选和耐药机制研究的案例。
通过以上介绍,您可以详细了解BaF3-EGFR-T790M-C797S稳转细胞系的产品信息、操作步骤、注意事项及背景参数,为您的实验研究提供有力支持。