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BaF3-EGFR-Del19稳转细胞系是通过将EGFR基因的19号外显子缺失突变(Del19)稳定转染至BaF3细胞中构建的。该细胞系广泛应用于EGFR信号通路研究、药物筛选及肿瘤生物学研究,尤其适用于针对EGFR突变型癌症的靶向药物开发。
高稳定性:通过稳转技术,EGFR-Del19突变在BaF3细胞中稳定表达,适合长期实验。
功能性验证:细胞系经过功能验证,确保EGFR-Del19突变在细胞中具有生物学活性。
应用广泛:适用于药物筛选、信号通路研究及肿瘤生物学研究。
高重现性:细胞系经过严格质量控制,实验结果具有高度可重复性。
细胞系名称:BaF3-EGFR-Del19
细胞类型:鼠源BaF3细胞
转染基因:EGFR-Del19突变
培养基:RPMI 1640 + 10% FBS + 1% Penicillin-Streptomycin + 2 ng/mL IL-3
储存条件:液氮或-80°C冰箱
包装规格:1 x 10^6 cells/vial
从液氮或-80°C冰箱中取出冻存的BaF3-EGFR-Del19细胞。
迅速将冻存管放入37°C水浴中,轻轻摇动至细胞完全解冻。
将细胞悬液转移至15 mL离心管中,加入5 mL预热的完全培养基(RPMI 1640 + 10% FBS + 1% Penicillin-Streptomycin + 2 ng/mL IL-3)。
以1000 rpm离心5分钟,弃上清。
用5 mL完全培养基重悬细胞,转移至T25培养瓶中,置于37°C、5% CO2培养箱中培养。
当细胞密度达到80-90%时,进行传代。
将细胞悬液转移至15 mL离心管中,以1000 rpm离心5分钟,弃上清。
用5 mL完全培养基重悬细胞,按1:3至1:5的比例分装至新的T25培养瓶中。
加入适量完全培养基,置于37°C、5% CO2培养箱中继续培养。
当细胞处于对数生长期时,收集细胞悬液,以1000 rpm离心5分钟,弃上清。
用冻存液(90% FBS + 10% DMSO)重悬细胞,调整细胞密度至1 x 10^6 cells/mL。
将细胞悬液分装至冻存管中,每管1 mL。
将冻存管放入程序降温盒中,置于-80°C冰箱过夜,次日转移至液氮中长期保存。
药物筛选:将BaF3-EGFR-Del19细胞接种于96孔板中,加入不同浓度的待测药物,培养48-72小时后,通过MTT或CCK-8法检测细胞活力。
信号通路研究:通过Western blot或流式细胞术检测EGFR及其下游信号分子的表达和活化状态。
肿瘤生物学研究:利用BaF3-EGFR-Del19细胞进行体内外肿瘤模型实验,研究EGFR-Del19突变在肿瘤发生发展中的作用。
细胞培养过程中需严格无菌操作,避免污染。
细胞复苏后需定期观察细胞状态,确保细胞健康生长。
冻存细胞时需使用程序降温盒,避免细胞因快速冷冻而受损。
实验过程中需设置对照组,确保实验结果的可靠性。
细胞活力:冻存前细胞活力>90%。
基因表达:通过PCR和Western blot验证EGFR-Del19突变在细胞中的稳定表达。
无菌检测:细胞培养上清液无菌检测阴性。
药物筛选:利用BaF3-EGFR-Del19细胞筛选针对EGFR-Del19突变的靶向药物。
信号通路研究:研究EGFR-Del19突变对下游信号通路(如PI3K/AKT、MAPK/ERK)的调控机制。
肿瘤生物学研究:构建BaF3-EGFR-Del19细胞移植瘤模型,研究EGFR-Del19突变在肿瘤发生发展中的作用。
运输条件:干冰运输。