产品及特点
本试剂盒适用可以处理各种液体样品(血液,血清,血浆,脑脊液,淋巴液,细胞培养上清液等)中提取 DNA,可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。它具有下列特点:
1. 试验操作简便,可快速获得液体样本的基因组 DNA;
2. 提取的 DNA 可直接用于下游试验,如 PCR、荧光定量 PCR 等。
使用方法
自备试剂
异丙醇、无水乙醇、RNase A(可选)。
(注意:使用前请先在缓冲液 Buffer WB2 中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签)
1. 在 2.0 ml 灭菌离心管中加入 200 - 400 μl 液体样本,加入 600μl 的 Buffer AL,涡旋震荡 3-5 sec,室温静置 10 min。
(注意:如要去除 RNA,可加入 4 μl RNase A(100 mg/ml),混匀,静置 5 min)
2. 加入 700 μl 的异丙醇,涡旋混匀 3-5 sec,13000g-15000 g 室温离心 15 min。
3. 小心吸弃上清,注意不要触及离心面管底的核酸沉淀。
4. 加入 1ml Buffer WB2,震荡数秒后 13000g-15000 g 室温离心 5 min。
(注意:缓冲液 Buffer WB2 具有挥发性,使用后需将瓶盖拧紧。)
5. 小心吸弃上清(残留的 Buffer WB2 可能会影响后续反应),注意不要触及离心面管底的核酸沉淀。此时管壁上可见膜状沉淀。
6. 加入 50 μl Buffer EB 用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀,使其溶解。溶解液如果混浊或有少量不溶物是正常现象,不溶沉淀物中就裹含有 DNA。直接取适量样品用于 PCR 或其他后续实验,也可保存于-20℃或-80℃。
(注意:当样本量很少时,可适当减少 Buffer EB 的量至 20μl。)
注意事项
如 Buffer AL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解;
样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降;
所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作;