产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
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一 、产品详情
中文名称：EGFRvIIIt过表达Nalm-6单克隆细胞株
稳转基因：名称：Homosapiensepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR),transcriptvariantEGFRvIII(序列：NM_001346941.2)EGFRvIIIt：EGFRvIII基因缺失胞内段的突变体。
荧光蛋白：RFP
细胞株抗性PuroR（嘌呤霉素抗性）
1.亲株细胞系：NALM-6人急性B淋巴白血病细胞系由19岁患有急性淋巴细胞白血病(ALL)的19岁男子的外周血建立，在1976年复发。该细胞CD24阳性，可与CD24阴性细胞N6/ADR成对，用于CD24的功能研究。
2.过表达基因EGFRvIII：EGFRvIII是表皮生长因子受体EGFR的2～7 外显子缺失形成的突变体。据报道，约5%的人肺鳞状细胞癌(SCC)中存在EGFRvIII突变。EGFRvIII可能在人NSCLC肿瘤的发生、发展中起重要作用。吉非替尼、厄洛替尼和HKI-272等药物可抑制EGFRvIII转化细胞的增殖和EGFRvIII阳性肿瘤的生长。
3.EGFRvIIIt：EGFRvIII全长基因缺失胞内段的突变体。
4.Nalm-6-RFP-Puro+EGFRvIIIt 单克隆细胞株：该细胞株是由慢病毒Lenti-RFP-Puro+EGFR vIIIt转导Nalm-6细胞经嘌呤霉素筛选和无限稀释法筛选构建而成，该细胞能在体外稳定过表达EGFRvIIIt和RFP。
5.细胞株质检：该单克隆细胞株在本库通过支原体检测，其亲代细胞在本库通过STR鉴定。
6.应用领域：CART的免疫治疗靶点。
| 传代方法 | 1:2~1:4传代，每2～3天传代或换液一次。 | 冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 |
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细胞株构建流程
| 1.构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； 2.慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； 3.用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； 4.采用无限稀释法筛选单克隆细胞株； 5.单克隆细胞株质检（COA）。 | ||
| 细胞备注 | 如混合稳转细胞株带抗性基因，建议每传8～10代用相应抗性药物筛选一次(2.5μg/mL)；或在细胞培养过程中添加适当浓度的抗性药物以维持细胞株阳性率(0.25μg/mL)。 | ||
二、细胞到货处理
常温到货细胞:T25细胞培养瓶寄送活细胞（细胞处于培养液中）的处理方法
1.观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系。
2.用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。若因运输问题，部分贴壁细胞从瓶壁脱落,先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2～4小时，以便稳定细胞状态。
3.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态，如有异常现象，例如污染，细胞状态差等，请拍照留证并及时与技术支持联系。
4.仅留适量细胞培养液（弃去多余），然后将细胞置于37°C，5%CO2培养箱培养。
5.根据细胞习性及时换液、传代、冻存细胞。
冻存管寄送活细胞（细胞处于全血清中）的处理方法：
1.用75%酒精彻底消毒细胞冻存管，然后在超净工作台将细胞悬液转移至15mL无菌离心管，500g，室温离心5min。
2.弃血清，用完全培养基重悬细胞沉淀。
3.将细胞接种于合适的细胞培养皿或培养瓶，然后置于37°C，5%CO2培养箱培养。
4.次日观察细胞形态，如有异常现象，例如污染，细胞状态差等，请拍照留证并及时与技术支持联系。
5.根据细胞习性及时换液、传代、冻存细胞。
干冰运输细胞
1.将细胞从干冰中取出后立即置于37°C水浴，轻轻转动冻存管，直至管内细胞完全融化（最好在1～2min内解冻）。
2.将冻存管转移到超净工作台，用75%酒精彻底消毒冻存管。
三、细胞培养
1、细胞复苏将含有1mL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中快速摇晃至溶解，然后在超净工作台将细胞转移至15mL无菌离心管，加入4mL培养基或无菌PBS混合均匀，室温，500g，离心5min，弃上清液，用完全培养基重悬细胞，将细胞移入培养瓶或培养皿培养，第二天更换培养液并检查细胞生长情况。
2、细胞传代
贴壁细胞传代：当细胞密度约80%时，可进行传代培养：吸出原培养皿中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3mL0.25%胰酶进行消化（注意根据实际情况，把握消化时间）。
镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉胰酶，加3~4mL完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。取部分细胞悬液转移至新的培养皿中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
悬浮细胞传代：当细胞密度约80%时，可进行传代培养：直接将原培养液和细胞一起转移至15mL或50mL无菌离心管，400～500g室温离心5min，吸掉培养基，用新鲜完全培养基重悬细胞根据细胞生长特性，按合适比例传代细胞，将细胞悬液转移至新的培养皿或培养瓶，将细胞置于37°C培养箱中培养。
3、细胞冻存收集细胞，500g，离心5min，弃上清液，加入无血清冻存液轻轻悬浮细胞，移入冻存管后进行冻存。
使用须知
1.本产品仅供购买方单方使用，不得向任何第三方赠送、转让或销售；
2.本产品仅供实验室和体外研究使用，不能用于任何临床检验、诊断、治疗，或任何非法用途；
3.收货48h内如若发现异常，请及时联系售后，逾期视为收货良好；
4.请严格按照本说明书操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。
