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细胞简介:
鸡外周血单核细胞分离自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中,再在从血液中提取分离得到造血干细胞,我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞,在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞,并在骨髓中发育。当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。与其他血细胞比较,单核细胞内含有更多的非特异性脂酶,并且具有更强的吞噬作用。单核细胞在血液中停留2-3天后迁移到周围组织中,细胞体积继续增大,直径可达50-80μm,细胞内所含的溶酶体颗粒和线粒体的数目也增多,成为成熟的细胞。固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞,它们经常大量存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素,参与机体防卫机制,还产生一些能促进内皮细胞和平滑肌细胞生长的因子。在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂,并包围异物。
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方法简介:
实验室分离的鸡外周血单核细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
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质量检测:
实验室分离的鸡外周血单核细胞经CD14免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
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培养信息:
培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
产品货号 | P24417 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 |
生长特性 | 半贴壁半悬浮 |
细胞形态 | 圆形、巨噬细胞样 |
传代特性 | 不增殖;不传代 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
鸡外周血单核细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴细胞是一种悬浮细胞,细胞形态呈圆形,在技术部标准操作流程下,细胞不增殖;不传代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50mL离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5mL新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37℃温浴2-3min,消化结束后,加入胰
酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,
收集细胞沉淀;
5)加入5mL新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察,用于实验;之后再按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 消化过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
特殊注意事项
6. 此细胞为悬浮细胞,请注意不要直接倒掉,造成损失;悬浮细胞因多数胞体较小,离心收集时,请注意悬液中细胞是否收集完全,可适当加大离心转速200转或增加离心时间3-5min,增加细胞获取量。
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考