细胞简介：

小鼠脊髓神经干细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是，在脑脊髓等所有神经组织中，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同，分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种，它具有其它所有干细胞的基本特征：具有自我维持和自我更新能力，具有多种分化潜能，具有分化为本系统大部分类型细胞的能力，这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生，对损伤和疾病具有反应能力。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖、迁移，并向神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点，体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后，可形成神经球，神经球在培养基中呈悬浮生长。

方法简介：

实验室分离的小鼠脊髓神经干细胞采用胰蛋白酶消化后差速贴壁，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来，总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的小鼠脊髓神经干细胞经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

小鼠脊髓神经干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片

三、使用方法

小鼠脊髓神经干细胞是一种悬浮细胞，细胞形态呈球形，在技术部标准操作流程下，细胞可传1-3代左右；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 悬浮细胞处理

1）收集T25细胞培养瓶中的培养基至50mL离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；

2）1200rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；3-1）添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中，用吸管轻轻吹打混匀，37℃温浴2-3min；消化结束后，加入胰酶抑制剂（避免使用血清）终止消化，用吸管轻轻吹打，分散神经干细胞球；

3-2）建议使用AccutaseTM消化液（Accutase消化液相对温和，对干细胞损伤小），添加消化液1mL至离心管中，用吸管轻轻吹打混匀，37℃温浴5-8min；消化结束后，无需终止，

用吸管轻轻吹打，分散神经干细胞球；3-3）若神经干细胞球较小，可加入2mL完全培养基，直接用吸管轻轻吹打，分散神经干细胞球；

4）1200rpm离心5min，弃上清，收集细胞沉淀；加入5mL新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

5）待细胞状态稳定后，培养观察；之后按换液频率更换新鲜的完全培养基。

3. 其他注意事项

 1）此细胞为悬浮细胞，请注意不要直接倒掉，造成损失；神经干细胞悬浮时聚集成球生

长，因运输会形成较大球体团块，需要消化分散处理。

2）使用TC处理培养瓶/皿培养，神经干细胞可能出现部分贴壁生长状态，可正常培养。如果包被PLL或基质胶可实现全贴壁生长状态。悬浮培养建议用未TC处理培养瓶/皿。

3）神经干细胞对消化液敏感，多次消化会引起损伤、贴壁分化，建议使用干细胞消化液或Accutase等减小细胞损伤。

4）添加血清或残留血清可以诱导神经干细胞自分化为星形胶质、神经元等神经细胞，建议用神经干细胞无血清专用完培培养。

四、注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 消化过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。

5. 该细胞只可用于科研。

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考