产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 5×105cells/T25细胞培养瓶 | ￥ 6800 | 3 |
细胞简介：
人关节韧带成纤维细胞分离自关节韧带组织；韧带是纤维结缔组织，将各个骨头在关节处连接起来，并在关节活动时加固关节稳定关节。其中颞下颌关节、踝关 节、膝关节韧带组织研究较多，颞下颌关节两侧各有三条，即颞下颌韧带、茎突下颌韧带和蝶下颌韧带。踝关节周围韧带根据其解剖位置可以分成3组，外侧韧带 ，内侧三角韧带，胫腓联合韧带。膝关节的韧带有囊外韧带和囊内韧带,其共同作用为加强关节的稳定性。囊外韧带主要有:髌韧带位于髌骨的下部，关节囊的前 方,是股四头肌肌腱的延续,向下附着于胫骨粗隆，两侧有侧副韧帶加强；囊内韧带:主要为交叉韧带:前交叉韧带附着于胫骨髁间隆起前份和股骨外侧髁的内侧面 ，防止胫骨过度前移;后交叉韧带附着于胫骨髁间隆起后份与股骨内侧髁的外侧面，防止胫骨过度后移。另外，在膝关节内尚有膝横韧带。任何关节韧带均可由于 外伤而发生损伤，但影响较大又较常见的是膝关节韧带损伤和踝关节韧带损伤。膝关节韧带损伤，常见者为膝关节侧副韧带损伤。多因膝关节微屈时，突然受到 内翻或外翻的冲击力所致。踝关节韧带损伤。多因行走或跑跳时误入不平之处所致。以外侧损伤多见。韧带是致密纤维结缔组织，主要特点是细胞、基质成分少 ，纤维非常多、纤维粗大排列紧密，且排列方向与承受张力的方向一致，有很强的保护和支持作用。韧带主要包含韧带成纤维细胞。人关节韧带成纤维细胞对研究关节韧带损伤有重要意义。
方法简介：
实验室分离的人关节韧带成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的人关节韧带成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息：
| 培养基 | 基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等 |
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 生长特性 | 贴壁 |
| 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 传代特性 | 可传3代左右 |
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5% |
人关节韧带成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人关节韧带成纤维细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈成纤维细胞样，在技术部标准操作流程下，细胞可传3代左右；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1）吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变
圆后，再加入5mL完全培养基终止消化；
3）用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4）待细胞完全贴壁后，培养观察，用于实验；之后再按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 复苏操作说明
1. 准备好37度水浴锅，预热至37度；
2. 准备好T25培养瓶，加入10ml完全培养基（培养基量必须大于冻存液10倍体积）；
3. 取出干冰内冻存细胞管，用EP手套包裹冻存管（防止管内进水导致污染），迅速放于水浴锅内，于1min内融化完全；
4. 取出冻存管，酒精喷洒消毒后擦干，置于超净台内；
5. 吸取冻存管内细胞悬液，加入步骤2中准备好的T25培养瓶内，8字缓慢摇匀；
6. 培养瓶放于37度CO2恒温培养箱内，静置培养24h，更换新鲜换培养基（注意贴壁细胞、
悬浮细胞不同换液操作方法）。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因
没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 消化过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
