产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 传代方法 | 第一次建议1:2传代 | 冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 |
| 细胞描述 | RKO-E6细胞是用脂质体法转染pCMV-E6的结肠癌RKO细胞系。RKO-E6细胞含有稳定整合受控於巨细胞病毒启动子的人乳头状病毒(HPV)E6癌基因，RKO-E6细胞和它的母系RKO一起可用于研究p53缺失引起的细胞参数改变p53介导的转录和凋亡等。 组织来源：结肠癌，转染插入到pCMV中的HPVE6 细胞类型：肿瘤细胞 肿瘤类型：肠癌细胞 生物安全等级：BSL-2 [Contains HPV6 and CMV viral sequences] 保藏机构：ATCC; CRL-2578 该细胞系培养所用基础培养基为 DMEM/F12,配置完全培养基时需加入 10%FBS, 10ng/mL EGF，1%Anti-Anti 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 | ||
| 培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 | ||
培养瓶中细胞操作步骤
对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。
2. 对于贴壁的细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中的多余培养基，至剩余5-8mL左右，随后将细胞置于含有5%CO的37℃恒温 培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶请立即传代。
3. 对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于含有5% CO 的37℃恒温培养箱中培养。
冻存细胞操作步骤
注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。
1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。
2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离心
4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用将细胞置于含有5%CO 的37℃恒温培养箱中培养。
贴壁细胞传代培养
1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。
3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。
4. 离心
5. 将细胞置于含有5%
传代比例：建议 1:2 （以培养瓶底面积计算）
培养基换液: 每隔 2 至 3 天。
