ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上,是生物膜上的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用,机体在缺氧及一些疾病状态 下,此酶活力发生一系列改变,另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为636nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理:
红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、酶促反应:按说明操作加入样本100l和混合试剂,37℃准确反应10分钟
2、加R4,3500转/分,离心10分钟,取上清
3、定磷:取上清液加入显色剂,室温静置2分钟加R6
4、室温静置5分钟636nm波长,1cm光径,比色