产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 96T | ￥ 260 | 10 |
ALT为一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶（相当于工业生产中的催化剂），起加快体内蛋白质氨基酸在体内转化的作用，它广泛存在于人体各种组织.器官.肌肉.骨骼中，以肝脏细胞的细胞浆中最多。当人体内各组织器官活动或病变时，就会把其中的ALT释放到血液中，使血清ALT含量增加。例如，肝脏发炎时，转氨酶就会从肝细胞释放到血液中，肝脏有病，血清转氨酶一定增高，当肝细胞千分之一有炎症时，血清转氨酶含量就会增高一倍以上，因此，血清转氨酶数量是肝脏病变程度的重要指标。
测定原理：
谷丙转氨酶（ALT）在 37℃及 PH7.4 条件下，作用于丙氨酸及 α-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应30min 后（固定时间）加入 2,4-二硝基苯肼（DNPH）盐酸溶液，既中止反应，同时 DNPH 与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于 505nm 比读吸光度并计算酶活力。
二、试剂的组成与配制：(试剂盒有效期 6 个月)
试剂一:谷丙转氨酶基质液,5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二:2,4—二硝基苯肼液,5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三:4mol/L 氢氧化钠液,5mL×1 瓶，室温密封保存；临用时按 4mol/L 氢氧化钠液:双蒸水=1∶9 的比例配成0.4mol/L 氢氧化钠液，需多少配多少，室温密封保存。
试剂四:2mmol/mL 丙酮酸钠标准液×1 支，4℃保存；
试剂五:0.1mol/L 磷酸盐缓冲液×1 支，4℃保存。
三、所需仪器及试剂：
可调 505nm 波长的酶标仪，蒸馏水，37℃水浴锅或恒温箱，蛋白测定试剂（组织或细胞用，本公司有售）。
四、操作过程：
1、样本前处理:
①、血清（浆）及其它液体样本待测：直接测定。
②、组织样本：准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下匀浆,制成10%的组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液用生理盐水稀释到适宜浓度(通过标准曲线计算得匀浆液卡门氏单位值小于 150)待测。(另取部分上清液测蛋白浓度,蛋白定量试剂盒本所有售)
③、培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推荐 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗 1～
2 次；1000 转/分,离心 10 分钟,弃上清,留细胞沉淀，加入匀浆介质（推荐加入 0.1mol/L 且 pH7～7.4 的磷酸盐缓冲液或生理盐水），冰水浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的匀浆液不离心，待测。
注意点： 1、比色法中常用的有赖氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King） 法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分 光光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报告 结果，比较准确。 卡门氏单位定义：1mL 液体，反应液总容量 3mL，波长 340nm， 1cm 光径，25℃，1min 内所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化 成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001 为一个单位（1 卡门氏 单位=0.482 U/L，25℃）。 2、一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试 剂空白孔（可以通过预试结果来判定）时可以双蒸水代替血 清作对照孔。所以成批标本测定时，一般不需要每一标本都 作本身血清对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄 疸或溶血血清，每份标本应作对照孔。 3、酶活力超过 150 卡门氏单位时，用生理盐水稀释后重测。 4、应将一般血清的对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日 常质控的指标之一；如相差大，可考虑α-酮戊二酸浓度、DNPH 浓度及仪器等原因引起。 5、血清中 ALT 在室温（25℃）可保存 2 天，在 0～4℃可保存一 周，在-25℃可保存 1 个月。
