尿微量白蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)测定原理:
在酸性介质中,CBB 与蛋白质的 NH3+基团结合引起由棕色到兰色的颜色变化,在 595nm 处有最大吸收峰。
试剂组成:
试剂一:CBB 试剂 60mL×1 瓶, 4℃保存。用时按 CBB 试剂:蒸馏水=1∶4 比例(即 5 倍稀释)配制成 CBB 应用液,现用现配。
试剂二:524mg/L 蛋白标准液 0.5mL×1 支,4℃可保存 1 个月(-20℃冷冻保存,可存放 6 个月)。
三、所需仪器及试剂:
可见光分光光度计及 1cm 光径比色皿(或酶标仪(595nm)及 96 孔板),涡旋混匀器,蒸馏水。
注意点:
1、样本蛋白浓度过低时可适当加大取样量(如取样 0.1 或 0.2mL,同时标准品应稀释 2 倍或 4 倍后和样本量体积一致,计算时标准品浓度除以相应的稀释倍数后再代入计算),而 CBB 应用液量不变;
2、测定管 OD 值过高时(测定 OD 减去空白 OD 后的差值比标准 OD 减空白 OD 的差值的 2 倍还大的)要将样本用生理盐水作一定稀释后(稀释后选择测定 OD 值接近标准 OD 值对应的稀释倍数)再测;
3、本试剂盒也可用酶标仪来读数(如在反应液静置 5 分钟后从每管中各取 0.2mL 到 96 孔板中(注意不要加入气泡),595nm 处读数),计算公式不变。