尿蛋白定性有生理性的,也有病理性,其阳性程度与肾损害程度不一定成正比。糖尿病患者尿中持续出现尿蛋白阳性,除外泌尿系感染、原发性肾病外,应考虑糖尿病肾病的诊断。有专家认为,糖尿病肾病早期蛋白尿呈间歇性,只在劳动或运动后为阳性反应。因此,运动后尿蛋白检验对诊断糖尿病肾病的早期发现有一定的意义。
一、测定原理:
在酸性介质中,CBB 与蛋白质的 NH3+基团结合引起由棕色到兰色的颜色变化,在 595nm 处有最大吸收峰。
二、试剂组成:(试剂盒有效期 6 个月)
试剂一:CBB 试剂 60mL×1 瓶, 4℃保存。用时按 CBB 试剂:蒸馏水=1∶4 比例(即 5 倍稀释)配制成 CBB 应用液,现用现配。
试剂二:524mg/L 蛋白标准液 0.5mL×1 支,4℃可保存 1 个月(-20℃冷冻保存,可存放 6 个月)。
三、所需仪器及试剂:
可见光分光光度计及 1cm 光径比色皿(或酶标仪(595nm)及 96 孔板),涡旋混匀器,蒸馏水。
六、注意点:
1、样本蛋白浓度过低时可适当加大取样量(如取样 0.1 或 0.2mL,同时标准品应稀释 2 倍或 4 倍后和样本量体积一致,计算时标准品浓度除以相应的稀释倍数后再代入计算),而 CBB 应用液量不变;
2、测定管 OD 值过高时(测定 OD 减去空白 OD 后的差值比标准 OD 减空白 OD 的差值的 2 倍还大的)要将样本用生理盐水作一定稀释后(稀释后选择测定 OD 值接近标准 OD 值对应的稀释倍数)再测;
3、尿蛋白定量测试盒 (CBB法)也可用酶标仪来读数(如在反应液静置 5 分钟后从每管中各取 0.2mL 到 96 孔板中(注意不要加入
气泡),595nm 处读数),计算公式不变。
免责声明 ....: 测试前请仔细阅读说明书,预试后再进行批量实验,否则由此导致的后果用户自行承担!