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赖氨酸(LYS)测试盒可见分光光度法
产品名称:
赖氨酸(LYS)测试盒可见分光光度法
产品编号:
YS2243A
产品类别:
分光法检测盒
存储条件:
2-8℃
保质期:
六个月
[价格]
规格 价格 库存
50管/48样 ¥ 1550 10

产品详情

赖氨酸(lysine,Lys)含量

<编号:YS2243A  可见分光光度法 50管/48样>

 

   意:正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

赖氨酸是人体必需氨基酸之一,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为第一限制性氨基酸。

 

测定原理:

蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2,它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质,其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同,而且仅有—个游离氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制标准液。

 

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅、60%乙醇

 

试剂的组成和配制:

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入12.5mL试剂三充分溶解混匀;

试剂二:液体12.5mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存;


赖氨酸提取:

样本烘干粉碎,称取约0.01g样本,加入1mL提取液,充分匀浆。80℃水浴提取20min,冷却后离心10min(10,000g离心力),取上清待测。

 

测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2、 工作液的配制:取10mL试剂一与10mL试剂二混合摇匀,取上清备用。用不完的试剂4℃保存。

3、 在有盖EP管中加入下列试剂:

试剂名称(μL)

测定管

空白管

(只做一管)

样本

200

 

提取液

 

200

工作液

400

400

混匀,80℃水浴30min(盖紧,以防止水分散失),冷却至常温。

60%乙醇(自备)

600

600

混匀,取1000μL至1mL玻璃比色皿中,于530nm波长处记录吸光值A。

△A=A测定管-A空白管。


赖氨酸含量计算:

标准条件下测定回归方程为y = 0.0062x - 0.0212;

x为赖氨酸含量(µg/mL),y为吸光值。

 

1. 按照蛋白浓度计算

赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

 

2.按照样本质量计算

赖氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W


V1:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,1 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。

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