上海细胞库
人源细胞系| 稳转细胞系| 基因敲除株| 基因点突变细胞株| 基因过表达细胞株| 重组细胞系| 猪的细胞系| 马细胞系| 兔的细胞系| 犬的细胞系| 山羊的细胞系| 鱼的细胞系| 猴的细胞系| 仓鼠的细胞系| 狗的细胞系| 牛的细胞| 大鼠细胞系| 小鼠细胞系| 其他细胞系|
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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50管/48样 | ￥ 80 | 10 |
注 意：正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。
氨基酸的 α -氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在 570 nm 有特征吸收峰；通过测定 570 nm 吸光度，来计算氨基酸含量（不包含脯氨酸和羟脯氨酸）。
台式离心机、水浴锅、酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
试剂一：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 1.667 mL 无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入 23.333 mL 试剂二混匀，避光保存。
试剂四：粉剂×1 管，4℃避光保存。临用前加 2.5mL 试剂二，充分溶解。
1. 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行室温匀浆，然后离心 10min（8000g离心力 4℃），取 200μL 上清转移到 1.5 mL EP 管中，加入 200μL 试剂二盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min，冷却至室温后待测。
2. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复30 次）；然后离心 10min（8000g离心力 4℃），取 200μL 上清转移到 1.5 mL EP 管中，加入 200μL试剂二盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min，冷却至室温后待测。
3. 血清等液体：取 200μL 转移到 1.5 mL EP 管中，加入 200μL 试剂二盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min，冷却至室温后待测。
1. 酶标仪预热 30 min，调节波长到 570 nm。
2. 在EP管中依次操作：
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 待测液 | 20 |
| 试剂二 | 200 |
| 试剂三 | 200 |
| 试剂四 | 20 |
| 混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 15 min， 取出冷却后反复颠倒EP 管数次，取200uL澄清液体于 570nm测定吸光值，记为A 测定管。 | |
显色后务必在 30min 内测完。
使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0027x + 0.0737 R2 = 0.9994
x：亮氨酸标准品浓度（μg/mL）y：吸光值A
（1） 按蛋白浓度计算
氨基酸含量（μg /mg prot）=370.4×(A 测定-0.0737)×V 样×(V 样总 ÷V 样)×2÷Cpr
=740.8×(A 测定-0.0737)÷Cpr
（2） 按样本质量计算
氨基酸含量（μg /g 鲜重）=370.4×(A 测定-0.0737)×V 样×(V 样总 ÷V 样)×2÷W
=740.8×(A 测定-0.0737)÷W
（3） 按细胞数量计算
氨基酸含量（μg /104 cell）=370.4×(A 测定-0.0737)×V 样×(V 样总 ÷V 样)×2÷细胞数量
=740.8×(A 测定-0.0737)÷细胞数量
（4） 按照液体体积计算
氨基酸含量（μg /mL）=370.4×(A 测定-0.0737)×2
=740.8×(A 测定-0.0737)
W：样品质量，g；V 样：反应体系中加入样品提取液体积，0.02 mL；V 样总：样品提取液总体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL。
