彩虹预染蛋白Marker II（3-40kD）-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
10T	￥ 500	10
50T	￥ 1500	10

彩虹预染蛋白Marker II（3-40kD）

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II（3-40 kD）

● 储存条件：

-20℃保存，有效期12个月

● 产品简介：

彩虹预染超低分子量蛋白质Marker II可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。

本产品由9种多肽和蛋白质组成，分子量大小为 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（绿色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（红色）

(注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过）。

● 使用说明：

第一次收到该产品，常温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底。

一. 制胶：

I 配制分离胶

1．按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。

4．静置15-30分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

表一（一块1 mm mini胶用量）

	分离胶	浓缩胶
	18％T, 5%C /5 ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA（19:1）	2.25 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×凝胶缓冲液	1.25 ml	0.5 ml
乙二醇（电泳级）	1.5 ml	/
ddH2O	/	1.25ml
10％APS	50 μl	20 μl
TEMED	5 μl	2 μl

II 配制浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留乙醇吸去。

1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

4．静置30-60分钟装待凝胶聚合

二. 电泳：

1. 取Marker样品，充分混匀后备用。不要加热处理。

2. 电泳前，将10×阳极缓冲液和10×阴极缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液处理）加入点样孔，参考下表进行电泳，至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。

表二多肽电泳条件

恒电压	150V
起始电流	60-75mA/板胶
结束电流	15-25mA/板胶
电泳时间	2.5-3小时

三. 染色

根据常规实验步骤，用配方6和7（表三：随货说明书）进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择购买本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液（YS6201），该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，还能对小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。

注：预染蛋白Marker由于嵌合了染料，在不同的凝胶系统中迁移率会有不同，因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小，请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。

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