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彩虹预染蛋白Marker(1.2-45KD)
产品名称:
彩虹预染蛋白Marker(1.2-45KD)
产品类别:
科研试剂
产品编号:
YS6110R
分子量:
(1.2-45KD)
存储条件:
-20℃
[价格]
规格 价格 库存
10T ¥ 750 10

产品详情

 彩虹预染超低分子量蛋白质Marker(1.2-45kD)


Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker

● 储存条件:

  -20℃保存,开封后有效期12个月

产品简介:

    彩虹预染超低分子量蛋白质Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。
    本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为1.2kD-45kD,分子量大小为  1.2kD,4.6kD,10kD,16kD,27kD,45kD
   (注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过)

使用说明:

第一次收到该产品,常温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底。

一. 制胶:

I 配制分离胶

1.按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(19:1)、4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

2.加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的无水乙醇,使凝胶表面保持平整。

4.静置15-30分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

表一  (一块1 mm mini胶用量)

 

分离胶

浓缩胶

 

18T, 5%C /5 ml

5T, 3.3%C/2 ml

40% PAA19:1

2.25 ml

/

40% PAA (29:1)

/

0.25 ml

4×凝胶缓冲液

1.25 ml

0.5 ml

乙二醇(电泳级)

1.5 ml

/

ddH2O

/

1.25ml

10APS

50 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl

 

II 配制浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留乙醇吸去。

1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和4×凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

2.加入10%过硫酸铵和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

3.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

4.静置30-60分钟装待凝胶聚合

二. 电泳:

1. 取Marker样品,充分混匀后备用。不要加热处理。

2. 电泳前,将10×阳极缓冲液和10×阴极缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液,内槽加入1×阴极缓冲液,轻柔拔出梳子,将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液处理)加入点样孔,参考下表进行电泳,至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。

表二 多肽电泳条件

恒电压

150V

起始电流

60-75mA/板胶

结束电流

15-25mA/板胶

电泳时间

2.5-3小时

三. 染色

根据常规实验步骤,用配方6和7(表三)进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择购买本公司的FastBlue蛋白染色液(货号:YS6202),该产品除具有染色快,无毒,灵敏性高等特点外,还能对小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离,是常规染色液的理想替代品。

 

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