规格 | 价格 | 库存 |
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10T | ¥ 750 | 10 |
彩虹预染超低分子量蛋白质Marker(1.2-45kD)
| 分离胶 | 浓缩胶 |
| 18%T, 5%C /5 ml | 5%T, 3.3%C/2 ml |
40% PAA(19:1) | 2.25 ml | / |
40% PAA (29:1) | / | 0.25 ml |
4×凝胶缓冲液 | 1.25 ml | 0.5 ml |
乙二醇(电泳级) | 1.5 ml | / |
ddH2O | / | 1.25ml |
10%APS | 50 μl | 20 μl |
TEMED | 5 μl | 2 μl |
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留乙醇吸去。
1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和4×凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2.加入10%过硫酸铵和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
4.静置30-60分钟装待凝胶聚合
二. 电泳:
1. 取Marker样品,充分混匀后备用。不要加热处理。
2. 电泳前,将10×阳极缓冲液和10×阴极缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液,内槽加入1×阴极缓冲液,轻柔拔出梳子,将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液处理)加入点样孔,参考下表进行电泳,至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
表二 多肽电泳条件
恒电压 | 150V |
起始电流 | 60-75mA/板胶 |
结束电流 | 15-25mA/板胶 |
电泳时间 | 2.5-3小时 |
三. 染色
根据常规实验步骤,用配方6和7(表三)进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择购买本公司的FastBlue蛋白染色液(货号:YS6202),该产品除具有染色快,无毒,灵敏性高等特点外,还能对小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离,是常规染色液的理想替代品。