实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人新布尼亚病毒抗体(NBV-Ab)表达。用纯化的人新布尼亚病毒NBV-Ab)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中新布尼亚病毒抗体(NBV-Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的新布尼亚病毒抗体(NBV-Ab)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOF℉值相比较，从而判定标本中人新布尼亚病毒抗体(NBV-Ab)的存在与否。
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50u。然后在待测样品孔先加样品稀释液40，然后再加待测样品10。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50ul,轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50山，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450m波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00：阴性对照平均值<0.10临界值(CUT OFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值<临界值(CUT OFF)者为新布尼亚病毒抗体(NBVAb)阴性阳性判定：样品OD值≥临界值(CUT OFF)者为新布尼亚病毒抗体(NBV-Ab)阳性
