上海细胞库
人源细胞系| 稳转细胞系| 基因敲除株| 基因点突变细胞株| 基因过表达细胞株| 重组细胞系| 猪的细胞系| 马细胞系| 兔的细胞系| 犬的细胞系| 山羊的细胞系| 鱼的细胞系| 猴的细胞系| 仓鼠的细胞系| 狗的细胞系| 牛的细胞| 大鼠细胞系| 小鼠细胞系| 其他细胞系|
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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 48T | ￥ 1200 | 1 |
| 96T | ￥ 1800 | 1 |
检测原理
试剂盒采用竞争法原理：将合成半抗原包被于酶标板上，同时加入样品和一抗抗体试剂，样品中的待测物与半抗原上偶联的待测物竞争结合一抗抗体，结合形成“半抗原-一抗抗体”免疫复合物，清洗去除游离的杂质后，再加入HRP标记的二抗抗体，结合形成“半抗原-一抗抗体-二抗抗体-HRP”免疫复合物，加入TMB显色，样本中待测物浓度越高蓝色越浅，加入终止液，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈反比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。
包含的实验材料实验材料
| 名 称 Label | 组成成分 Kit Components | 数量（48T） Quantity | 数量（96T） Quantity |
| 酶标板 | 预包被捕获半抗原的酶标板 | 8×6条 | 8×12条 |
| 校准品（10×） | 校准品（2000μmol/L） | 1支×500μL | 1支×1000μL |
| 一抗抗体（10×） | 10倍浓缩一抗抗体 | 1支×300μL | 2支×300μL |
| 酶标二抗 | HRP标记的二抗抗体 | 1瓶×6mL | 1瓶×12mL |
| 通用稀释液（20×） | 样品/校准品/一抗抗体通用稀释液 | 1支×10mL | 1支×15mL |
| 浓缩洗液（20×） | 20倍浓缩洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
| 显色剂 | TMB、过氧化氢 | 1支×6mL | 1支×12mL |
| 终止液 | 稀硫酸、抗沉淀剂 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。
需要但未包含的实验材料
· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套枪头；
· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
5. 试剂的准备及储存
· 试剂盒各组分应储存于2~8℃保存；
· 使用前请确保试剂盒按规定的条件储存，每次实验仅准备所需实验用量的试剂。
· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。
1×通用稀释液的配制：用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL的20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。
1×一抗抗体工作液的配制：10×一抗抗体用“1×通用稀释液”按1:10倍稀释，例如：100uL的（10×）酶标抗体加入900uL的“1×通用稀释液”，混合均匀。配制好的1×一抗抗体工作液可以在2~8℃保存8h。
· 工作校准品的配制：准备7个离心管，将10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液”按1:10倍稀释，例如：100uL的10×校准品加入900uL的“1×通用稀释液”，混合均匀。在此后的6支离心管内，将S1倍比稀释6个梯度至S7，共配制7个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下图所示，“1×通用稀释液”作为零浓度校准品S0，共8支校准品。
样品采集、预处理及储存
· 组织：组织称重后剪碎，将剪碎的组织加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量体积比，比如100mg的组织样品对应400uL的裂解液，具体可根据实验需要适当调整，最后将匀浆液于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
· 细胞：取适量细胞，于冰上进行超声破碎，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
· 细胞上清：取细胞上清于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
. 实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
| 1 | 编号 | 检测试验需设置校准品孔、样品孔、空白孔，合理规划各样本的排布。 |
| 2 | 稀释 加样 | 每孔加入校准品/待测样品50μL，之后每孔再加入一抗抗体50uL |
| 3 | 温育 | 盖上封板膜，在37℃下孵育60分钟。 |
| 4 | 洗板 | 洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。 |
| 5 | 加酶 | 每孔加入100μL酶标二抗工作液。 |
| 6 | 温育 | 盖上封板膜，在37℃下孵育30分钟。 |
| 7 | 洗板 | 洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。 |
| 8 | 显色 | 每孔加入100μL显色液37℃下避光孵育15分钟。 |
| 9 | 终止 | 每孔加入50μL终止液。 |
| 10 | 测量 | 单波长：使用酶标仪在450nm检测波长测定吸光度值； 双波长：使用酶标仪在450nm/630（620-650）检测波长测定吸光度值； 如果最高浓度校准品OD值过高，应立即在405/630nm双波长条件下检测。 |
8. 结果计算
建议使用以下方式进行标准曲线的拟合：
l 四参数逻辑（4-P）曲线或者Logit-Lot拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；
建议使用专业化软件进行结果拟合和计算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。示例数据
9. 检测的局限性
样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。样本浓度低于LOQ定量限时，检测结果无法进行准确定量。
10. 产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
灵敏度：2.55μmol/L
精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中测定，没有观察到明显的交叉反应。
11. 注意事项
· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！
· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。
· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。
12. 技术要点
· 不同批次的试剂盒不能混用，不建议将不同板上的微孔板条组装在一块板上检测，尽管是同一批次试剂，也可能存在板与板之间的差异。
· 每次实验时应当始终配制标准曲线平行检测，不能将上一次的标准曲线用于下一次实验结果的计算。
· 不要使用超过有效期的试剂盒进行检测。
· 底物显色剂应当为无色，如变蓝表明已变质，不能应用于实验。
· 使用适当的封板膜密封微孔板条，以便检测结果更加可靠。
· 操作时尽量避免产生气泡。不要将不同试剂瓶的瓶盖交叉使用。
· 应当遵循说明书的操作进行实验，不按照说明书的操作将导致实验结果的变化，任何不遵循说明书的实验操作应当事先询问售后技术支持的建议。否则我们不保证实验结果的可靠。
植物腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）ELISA试剂盒
