产品简介:
采用特异性结合病毒 RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒RNA 提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒 RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒 RNA 的提取要求, 如病毒 RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和 HTLV(人类嗜 T 淋巴细胞病毒);等等。病毒裂解后,RNA 后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒 RNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸
无杂质和 PCR 抑制剂,可直接适用于 PCR/RT-PCR 等分析。
它具有下列特点:
1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在 20 分钟内完成。
3. 多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒 RNA 纯度高,质量稳定可靠,可
适用于各种常规操作,包括 PCR/RT-PCR 等。
使用步骤:
第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇!
1.200μl 血清等体液(需回复到室温,不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足)转入上述1.5ml 离心管,加入 400μl 裂解液 RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。
2.室温(15-25℃)放置 10 分钟,每隔 5 分钟,振荡混匀一次。
3.加入 450μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4.将上述混合物加入一个吸附柱 RA 中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心 30-60秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积超过 750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱 RA 中。
5. 加 500μl 去蛋白液 RE,12,000rpm 离心 30 秒,弃废液。
6. 加入 500μl 漂洗液 RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 秒,弃废液,加入 500μl 漂洗液 RW,重复一遍。
7. 将吸附柱 RA 放回空收集管中,13,000rpm 离心 2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8. 取出吸附柱 RA,放入一个 RNase free 的离心管中,在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free H20(事先在 65-70℃水浴中加热效果更好), 室温放置 1 分钟,
12,000rpm 离心 1 分钟。如果想得到较多量的 RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm 离心 1 分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要 RNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于 20μl,体积过小降低洗脱效率,减少 RNA 产量。
9. RNA 病毒建议最好立刻使用,否则立刻短期放置在-70℃备用。
注意事项:
提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子,每种RNA 有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测 OD 检测,只能通过PCR 或 RT-PCR 检测,而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十分不容易。