储存:-20℃可保存 2 年。
注意:10×phi29 Buffer、Buffer D(变性液)、Buffer N(中和液)含有高浓度的盐,实验时务必做好防护。皮肤和眼睛接触后,立即大量清水清洗,并就医。
操作方法
1. 模板变性与中和
Template DNA(0.01-10 ng/μl) 2.5 μlBuffer D 2.5 μl漩涡混合均匀后,室温放置3min后,立即加入2.5μl BufferN 进行中和(此时总体积为 7.5μl)。
注意:
(1)模板 DNA 可以是纯化的质粒、gDNA、菌液、培养细胞
(2)变性反应采用碱变性方法,因此变性时间不宜超过 5min,过长的时间会造成模板损伤。
2,扩增发应:
漩涡混合均匀后,放置于 30℃恒温扩增 2h。必要情况下,65℃10min 进行失活反应。产物 4℃短期保存(<3 天),或-20℃长期保存。
功能测试: