核酸酶ELISA试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
96T	￥ 2800	10

产品简介

本品采用双抗夹心法检测样本中 Benzonase 含量。将 Benzonase 特异性抗体预包被在微孔板上，使用时将标准品与待测样本分别加入到已包被特异性抗体的反应孔内，样本中的 Benzonase 会与微孔板中的抗体结合，孵育后洗涤以去除微孔板内未结合的物质，加入 Benzonase 检测抗体（HRP 标记），形成抗体 - 抗原 -HRP 标记抗体的复合物，加入 TMB 进行孵育显色，显色程度与 Benzonase 浓度成比例关系，通过测定 Benzonase 标准品的显色来判断样本中 Benzonase 残留程度。

检测范围： 0.094~6 ng/ml

定量限： 0.094 ng/ml

检测限： 0.019 ng/ml

产品组成：

组分	组分 ( 中文 )	规格
Benzonase Standard	Benzonase 标准品	1000 ng/ml, 0.8 ml, 1 Vial
Benzonase Detection Antibody (HRP labeled)	Benzaonase 检测抗体（HRP 标记）	12 ml, 1 Vial
TMB Substrate	TMB 底物	12 ml, 1 Vial
Stop Solution	终止液	12 ml, 1 Vial
Sample Diluent	样品稀释液	50 ml, 1 Vial
Wash Buﬀer (20×)	漂洗液	50 ml, 1 Vial
Microtiter Plate (Coated)	预包被酶标板	96 孔 , 1 Plate

所需器材：酶标仪、微孔板恒温振荡器、涡旋振荡器、移液器、封板膜等。

试剂配制

1. 平衡：将所需试剂转移到室温（25 ± 3℃) 平衡至少 30 min；确定测定运行的孔数，取出所需的酶标条，其它放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封并置于 2~8℃保存。

2. 1 × 漂洗液配制：根据本次试验所需洗板液体积，量取漂洗液（20× )适量，用去离子水按照 1:20 体积比稀释，混匀后备用。

3. 标准品溶液配制（示例）：

序号	标准液浓度（ng/ml）	标准液体积(μl）	稀释液体积(μl）	总体积(μl）	终浓度（ng/ml）	剩余体积(μl）
StA	1000	20	180	200	100	170
St8	100	30	470	500	6	250
St7	6.0	250	250	500	3.0	250
St6	3.0	250	250	500	1.5	250
St5	1.5	250	250	500	0.75	250
St4	0.75	250	250	500	0.375	250
St3	0.375	250	250	500	0.188	250
St2	0.188	250	250	500	0.094	250
St1(Blank)	/	/	300	300	0	300

实验流程

1. 混匀：临用前将平衡至室温的试剂轻轻混匀。

2. 加样：分别加入 100 μl 标准品溶液 (St1~St8) 或待测样品至相应孔中，加盖或封板膜封板后在室温（25 ± 3 ℃)条件下 400~500 rpm 孵育 1 h。

3. 洗涤：甩掉孔内液体，每孔加入至少 1× 漂洗液 350 μl （可用多通道移液器或者洗瓶），再甩去孔内液体后于无尘纸上轻拍至拍干。重复 3 次。（注意：在加入 Benzonase 检测抗体溶液前勿使板孔长时间过分干燥。洗涤不当可能使复孔间 CV 值偏大，信号偏高或偏低）。

4. 标记：每孔加入 Benzonase 检测抗体（HRP 标记）溶液 100 μl ，加盖或封板膜封板后在室温（25 ± 3℃ )条件下 400~500 rpm 孵育 30 min。

5. 洗涤：甩掉孔内液体，每孔加入至少 1× 漂洗液 350 μl （可用多通道移液器或者洗瓶），再甩去孔内液体后于无尘纸上轻拍至拍干。重复 3 次。（注意：在加入 TMB 底物前勿使板孔长时间过分干燥）

6. 显色：每孔加入 TMB 底物 100 μl ，室温（25 ± 3℃)避光显色 20 min。

7. 终止：每孔加入终止液 100 μl，轻轻敲击孔板使混匀，终止反应。 8. 测定：加入终止液后 10 min 内，在 450 nm 波长处读取吸光值。

结果计算

本品建议采用浓度取 10 为底的对数后采用四参数 Logistic 模型拟合方式进行拟合计算。

标准品浓度（ng/ml）	吸光值
标准品浓度（ng/ml）	测定 1	测定 2	均值
6	1.770	1.778	1.774
3.0	1.088	1.153	1.121
1.5	0.704	0.658	0.681
0.75	0.386	0.417	0.401
0.375	0.241	0.241	0.241
0.188	0.154	0.169	0.161
0.094	0.116	0.122	0.119
0	0.082	0.082	0.082

典型标准曲线图谱（四参数 Logistic 模型）

产品性能

检测限：0.019 ng/ml。将 20 个空白对照的平均吸光值加上 2 个标准偏差后代入标曲确定。

定量限： 0.094 ng/ml。确保变异系数 (n=6) 在 20% 以内的最低浓度。

线性：测定不同浓度的标准品溶液，并绘制曲线， R2≥0.98。

重复性：三个已知浓度样品重复测试 20 次，评估重复性。

中间精密度：三个已知浓度样品不同时间不同人测试 4 次，评估中间精密度。

名称	重复性（n=20）			中间精密度（n=4）
名称	低浓度	中间浓度	高浓度	低浓度	中间浓度	高浓度
均值（ng/ml）	0.28	0.92	4.55	0.28	0.92	4.49
SD	0.035	0.075	0.371	0.037	0.078	0.343
CV（%）	12.4	8.2	8.1	13.1	8.6	7.6