人基孔肯雅病毒（CHIKV）Elisa试剂盒

（酶联免疫法）

 

产品货号：YS04404B

1. 预期用途

本试剂盒用于检测血清、血浆中的人基孔肯雅病毒(CHIKV)存在与否，仅供研究使用，不得用于诊断。

2. 检测原理 

该试剂盒采用双抗体夹心法原理：将抗体包被于酶标板上，加入样品，样品中的抗原与抗体结合形成“抗体-抗原”免疫复合物，清洗去除游离的杂质，再加入HRP标记的酶标抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物，清洗去除多余的酶标抗原，加入TMB显色，再加入终止液，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测抗体的浓度呈正比。

3. 包含的实验材料实验材料

名 称 Label	组成成分 Kit Components	数量（48T） Quantity	数量（96T） Quantity
酶标板	抗体包被板	8×6条	8×12条
阳性对照	阳性对照	1支×0.5mL	1支×1mL
阴性对照	阴性对照	1支×0.5mL	1支×1mL
酶标记物	HRP酶标记抗体	1支×5mL	1支×10mL
样品稀释液	PBS、BSA等	1支×5mL	1支×10mL
浓缩洗液（20×）	20倍浓缩洗液	1支×15mL	1支×25mL
显色剂A	过氧化氢	1支×3mL	1支×6mL
显色剂B	TMB	1支×3mL	1支×6mL
终止液	稀硫酸、抗沉淀剂	1支×3mL	1支×6mL

如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。

4. 需要但未包含的实验材料

· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；

· 移液器、多通道移液器及配套枪头；

· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；

· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；

· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；

· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。

 

 

5. 试剂的准备及储存

· 试剂盒各组分应储存于2~8℃保存；

· 使用前请确保试剂盒按规定的条件储存，每次实验仅准备所需实验用量的试剂；

· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。配制好的洗液可以在室温保存1周；

6. 样品采集、预处理及储存

下面列出的样品收集和储存条件旨在作为一般性指导，不同类型样品的储存、使用稳定性尚未完全评估。

· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，冷冻储存血清样品冻融不超过2次。

· 血浆：使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，冷冻储存血浆样品冻融不超过2次。

· 不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血样品。

· 样品应无微生物污染。

7. 实验步骤

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。

注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。

1	合理安排阳性对照孔、阴性对照孔、空白孔、样品孔。
2	阳性对照孔加入阳性对照100uL，阴性对照孔加入阴性对照100uL。阴阳对照各设置3孔。
3	样本孔先加入样品稀释液80uL，再加入样本20uL。 空白孔不加样品不加酶，其余操作与样品孔相同。
4	盖上封板膜，在37℃下孵育40分钟。
5	洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。
6	每孔加入预先配制好的酶标抗体工作液100μL。
7	盖上封板膜，在37℃下孵育40分钟。
8	洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。
9	每孔加入显色剂A、显色剂B各50uL
10	37℃下避光孵育15分钟。
11	每孔加入终止液50μL。
12	使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值，如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高，应立即在405/630nm双波长条件下检测。

 

8. 阳性判断值Cut-Off

Cut-Off =阴性对照孔平均OD值（阴性对照孔OD均值小于0.050时，按0.050计算）。

例：阴性对照孔平均OD值为0.100，则Cut-OFF值=0.100；

阴性对照孔平均OD值为0.020，则Cut-OFF值=0.050。

9. 结果判断

阳性结果：样本OD值＞Cut-OFF值，结果判为阳性；

阴性结果：样本OD值≤Cut-OFF值，结果判为阴性；

10. 检测的局限性

样本浓度低于检出限时，检测结果无法进行准确判断。本试剂为定性试剂，不能作为定量试剂使用。

11. 产品性能指标

以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。

检测3份企业阳性参考品，结果均为阳性。检测3份企业阴性参考品，结果均为阴性。

精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。

特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为10μg/mL测定，没有观察到明显的交叉反应。 

12. 注意事项

· 试剂盒内所有成分仅供研究使用！

· 终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，应谨慎操作。

· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等，可能引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。

· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。

· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品，实验操作后彻底洗手。

13. 技术要点

· 不同批次的试剂盒不能混用，不建议将不同板上的微孔板条组装在一块板上检测，尽管是同一批次试剂，也可能存在板与板之间的差异。

· 每次实验时应当始终配制标准曲线平行检测，不能将上一次的标准曲线用于下一次实验结果的计算。

· 不要使用超过有效期的试剂盒进行检测。

· 底物显色剂应当为无色，如变蓝表明已变质，不能应用于实验。

· 使用适当的封板膜密封微孔板条，以便检测结果更加可靠。

· 操作时尽量避免产生气泡。不要将不同试剂瓶的瓶盖交叉使用。

· 应当遵循说明书的操作进行实验，不按照说明书的操作将导致实验结果的变化，任何不遵循说明书的实验操作应当事先询问售后技术支持的建议。否则我们不保证实验结果的可靠。

人基孔肯雅病毒（CHIKV）Elisa试剂盒