规格 | 价格 | 库存 |
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48T | ¥ 1200.00 | 1 |
96T | ¥ 1800 | 121 |
人脑膜炎奈瑟菌抗体(N.meningitidis-Ab)
产品货号:YS04406B
1. 预期用途
本试剂盒用于定性检测血清、血浆中的人脑膜炎奈瑟菌抗体(N.meningitidis-Ab)存在与否,仅供研究使用,不得用于诊断。
2. 检测原理
试剂盒采用双抗原法原理:将抗原包被于酶标板上,加入样品,样品中的抗体与抗原结合形成“抗原-抗体”免疫复合物,清洗去除游离的杂质,再加入HRP标记的酶标抗原,形成“抗原-抗体-酶标抗原”夹心复合物,清洗去除多余的酶标抗原,加入TMB显色,再加入终止液,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测抗体的浓度呈正比。
3. 包含的实验材料实验材料
名 称 Label | 组成成分 Kit Components | 数量(48T) Quantity | 数量(96T) Quantity |
酶标板 | 抗原包被板 | 8×6条 | 8×12条 |
阳性对照 | 阳性对照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
阴性对照 | 阴性对照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
酶标记物 | HRP酶标记发热伴血小板减少综合征布尼亚重组抗原 | 1支×5mL | 1支×10mL |
样品稀释液 | PBS、BSA等 | 1支×5mL | 1支×10mL |
浓缩洗液(20×) | 20倍浓缩洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
显色剂A | 过氧化氢 | 1支×3mL | 1支×6mL |
显色剂B | TMB | 1支×3mL | 1支×6mL |
终止液 | 稀硫酸、抗沉淀剂 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需单独采购通用型组分,请提供对应的组分名称。
4. 需要但未包含的实验材料
· 蒸馏水或去离子水,一次性离心管、一次性手套等耗材;
· 移液器、多通道移液器及配套枪头;
· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具;
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料;
· 微孔板振荡器(如有需要)、离心机、旋涡振荡器等辅助设备;
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
5. 试剂的准备及储存
· 使用前请确保试剂盒按规定的条件储存,每次实验仅准备所需实验用量的试剂;
· 1×洗液的配制:浓缩洗液(20×)如有晶体析出,需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释,例如:10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水,混合均匀。配制好的洗液可以在室温保存1周;
6. 样品采集、预处理及储存
下面列出的样品收集和储存条件旨在作为一般性指导,不同类型样品的储存、使用稳定性尚未完全评估。
· 血清:使用血清采集管采集全血,室温静置待血细胞凝集后取的血清,或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和,避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测,如不能及时进行检测,应等分为多份,储存在-20℃及以下温度条件,储存时间不超过6个月,冷冻储存血清样品冻融不超过2次。
· 血浆:使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和,避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测,如不能及时进行检测,应等分为多份,储存在-20℃及以下温度条件,储存时间不超过6个月,冷冻储存血浆样品冻融不超过2次。
· 不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血样品。
· 样品应无微生物污染。
7. 实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右,也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意:酶标板未恢复室温前,请勿开封。
1 | 合理安排阳性对照孔、阴性对照孔、空白孔、样品孔。 |
2 | 阳性对照孔加入阳性对照100uL,阴性对照孔加入阴性对照100uL。阴阳对照各设置3孔。 |
3 | 样本孔先加入样品稀释液80uL,再加入样本20uL。 空白孔不加样品不加酶,其余操作与样品孔相同。 |
4 | 盖上封板膜,在37℃下孵育30分钟。 |
5 | 洗板5次,最后一次洗板后弃去残留洗液,倒扣酶标板,在干净的吸水纸上拍干。 |
6 | 每孔加入预先配制好的酶标抗体工作液100μL。 |
7 | 盖上封板膜,在37℃下孵育30分钟。 |
8 | 洗板5次,最后一次洗板后弃去残留洗液,倒扣酶标板,在干净的吸水纸上拍干。 |
9 | 每孔加入显色剂A、显色剂B各50uL |
10 | 37℃下避光孵育15**分钟。 |
11 | 每孔加入终止液50μL。 |
12 | 使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值,如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高,应立即在405/630nm双波长条件下检测。 |
8. 阳性判断值Cut-Off
Cut-Off =阴性对照孔平均OD值×2.1(阴性对照孔OD均值小于0.050时,按0.050计算)。
例:阴性对照孔平均OD值为0.100,则Cut-OFF值=0.100×2.1=0.210;
阴性对照孔平均OD值为0.020,则Cut-OFF值=0.050×2.1=0.105。
9. 结果判断
阳性结果:样本OD值>Cut-OFF值,结果判为阳性;
阴性结果:样本OD值≤Cut-OFF值,结果判为阴性;
10. 检测的局限性
样本浓度低于检出限时,检测结果无法进行准确判断。本试剂为定性试剂,不能作为定量试剂使用。
11. 产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出,未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
检测3份企业阳性参考品,结果均为阳性。检测3份企业阴性参考品,结果均为阴性。
精密度:板内精密度CV<10%(N=20),板间精密度CV<15%(N=20)。
特异性(Analytical specificity):其他相关因子在稀释缓冲液中制备为10μg/mL测定,没有观察到明显的交叉反应。
12. 注意事项
· 试剂盒内所有成分仅供研究使用!
· 终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,应谨慎操作。
· 试剂盒成分含防腐剂、蛋白成分等,可能引起皮肤过敏反应,应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 显色剂、浓缩洗液可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激,应佩带口罩避免吸入薄雾。
· 佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品,实验操作后彻底洗手。
13. 技术要点
· 不同批次的试剂盒不能混用,不建议将不同板上的微孔板条组装在一块板上检测,尽管是同一批次试剂,也可能存在板与板之间的差异。
· 每次实验时应当始终配制标准曲线平行检测,不能将上一次的标准曲线用于下一次实验结果的计算。
· 不要使用超过有效期的试剂盒进行检测。
· 底物显色剂应当为无色,如变蓝表明已变质,不能应用于实验。
· 使用适当的封板膜密封微孔板条,以便检测结果更加可靠。
· 操作时尽量避免产生气泡。不要将不同试剂瓶的瓶盖交叉使用。
· 应当遵循说明书的操作进行实验,不按照说明书的操作将导致实验结果的变化,任何不遵循说明书的实验操作应当事先询问售后技术支持的建议。否则我们不保证实验结果的可靠。
14. 存储及有效期
· 试剂盒各组分应储存于2~8℃保存;
· 未开封有效期为六个月,开封后请尽快使用。
人脑膜炎奈瑟菌抗体(N.meningitidis-Ab)Elisa试剂盒