使用方法
关于仪器设置：
温度对检测有较大影响。有条件的话，务必使用配有温度控制的酶标仪。
常规的荧光信号强度测量，使用基于单色仪或基于过滤器的酶标仪，最佳激发波长使用450-460 nm，发射波长使用586-600 nm。可根据实际机器和样本选择信号最强的波长。
具有检测增益参数（PMT，Parameters）的通常设置为中或高。
使用bottom read读数和top read读数均可，基于不同的细胞模型，建议在预实验时两种读数模式均尝试下，看哪种的趋势更加明显。
关于氧气封闭液使用：
氧气封闭液可以用移液器吸取添加，添加时需要沿着培养板壁慢慢加入，使其顺板壁向下流到培养基表面。
也可以直接用滴瓶滴加，倒转预热的滴管瓶并轻轻施加压力，使封闭液足以充注瓶尖。 每个孔滴两滴，使每个液滴在孔侧面顺应向下流到培养基表面。
使用移液器添加封闭液时，可将黄色吸头的嘴部用锋利的刀片或剪刀修剪处理。将竖直吸头离尖端3-4 mm处45°角修剪处理。
取下滴管瓶内嘴盖，轻轻吸取预热的氧气封闭液。避免上下吹吸形成气泡。
关于细胞培养：
对于贴壁细胞，在200 μL培养基中的96孔板中接种细胞。在37°C的CO2培养箱中孵育过夜。
对于悬浮细胞，在检测当天在100 μL培养基中接种。
注意所需的接种密度取决于细胞类型。 我们推荐进行细胞接种密度预实验以确定最佳密度。通常从高细胞密度（通常为60,000）开始，每孔的最佳细胞数一般为：贴壁细胞每孔80,000个细胞，悬浮细胞每孔5-6 x 105（96孔板）。
检测待测样品都设置3复孔。
注意始终在每个96孔板上留出至少6个孔，以免添加细胞作为空白对照和信号控制孔。
1. 准备细胞模型。
2. 培养好的待检测细胞移除培养基，用PBS洗涤细胞。
3. 加入100 μL新鲜培养基。
4. 加入4 μL R01氧荧光探针，充分混匀。
5. （可选）可以在此处添加待测试化合物（通常为1-10μL）（如果需要的话）。
6. 每孔加入100 μL氧气封闭液。
7. 然后用该细胞板进行荧光细胞外O2消耗变化情况检测。
激发波长455 nm - 468 nm，发射波长603 nm。测定荧光强度，每2分钟或3分钟读取一次。
8. 绘制耗氧率曲线。
9. 计算每个样品的斜率值。
