简介:
StemPro-34 SFM 是一种无血清培养基,专门配制用于支持人造血细胞在培养物中的生长,包括从骨髓、新生儿脐带血和外周血中分离的 HSC 和祖细胞。
StemPro-34 SFM 是一种灵活的细胞培养基,可用于多种应用。
细胞收到后处理
半贴壁、半悬浮细胞处理方法:
1、该细胞是半贴壁半悬浮生长,悬浮细胞用离心管收集细胞悬液,1000rpm 离心 5min,收 集上清(后期对比培养使用)。
2、当未超过 80%汇合度时,将离心收集到的悬浮细胞沉淀加入 5ml 完全培养基重悬,加入 原培养瓶中,放入 37℃、5%CO2 孵箱培养。
3、超过 80%汇合度时,将贴壁细胞根据贴壁细胞传代方法消化、离心、收集;将悬浮细胞 和贴壁细胞的沉淀用 1-2ml 完全培养基重悬收集到一起,混匀后,按 1:2 进行分瓶传代(2 个 T25)。
(传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培养基,另外一瓶用自己配的完全培养基, 进行对比培养。)
(注意:如收到密封培养瓶,处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松)
冻存细胞到货处理
1、收到细胞后,检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等 问题,请即时联系。
2、将细胞取出转移至液氮或-80 度冰箱保存,建议尽早复苏。
3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系,会有技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管。特别说明:未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。
细胞复苏
1、 从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中,1000rpm 离心 5min;
3、弃上清,沉淀用 5ml 完全培养基重悬,接种 T25 培养瓶,于 37℃,5%CO2 细胞培养箱中 培养;
4、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
细胞传代 1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时,收集 T25 培养瓶中的悬浮细胞培养液,1000rpm 离心 5min;
2、贴壁细胞用 PBS 清洗一次,添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中,倒置显微镜 下观察,待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养基终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后 将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm 离心 5min;
3、弃上清,将悬浮细胞和贴壁细胞的沉淀用 1-2ml 完全培养基重悬收集到一起,混匀后, 按 1:2 进行分瓶传代(2 个 T25)。补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶,最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养;
细胞冻存
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时,收集 T25 培养瓶中的悬浮细胞培养液,1000rpm 离心 5min;
2、用 PBS 清洗细胞一次,添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观 察,待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养基终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬 液转移至 15ml 离心管中,1000rpm 离心 5min;
3、 弃上清,将悬浮细胞和贴壁细胞沉淀加入 1ml/支的雅吉无血清冻存液(7001),重 悬收集到一起,混匀后加入冻存管中。(如:冻一支,加入 1ml 无血清冻存液)
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要将细胞转入液氮罐中,需在-80℃冰箱 存放 24 小时以上。