产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 800 | 10 |
产品简介
本试剂盒提供特殊的组份可提取细胞及组织中的膜蛋白，提取Buffer采用特殊配方在裂解细胞的同时可以选择性地分离提取细胞膜蛋白和细胞器膜蛋白。提取方法简单、可靠、快速同时获得的膜蛋白纯度高，可用于SDS-PAGE、Western Blot、免疫共沉淀或细胞信号传导等后续研究，每次可以提取107个培养细胞或200 mg动物组织。
本试剂盒可以使用50次。
产品特点
1. 整个操作过程只需要60 min左右。
2. 即可以用于培养细胞（50X 107个）又可以用于动物组织（50X 200 mg）蛋白质的提取。
3. 避免蛋白酶对蛋白质的降解，保持膜蛋白质的完整性和天然活性。
4. 提取的膜蛋白纯度高，不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件
在常温下运输，收到后将蛋白酶抑制剂、1X Loading Buffer、DTT置于-20°C的环境中保存，其余组分置于4°C保存，保质期两年。
操作步骤
1. 对于悬浮培养或用细胞刮刮下的贴壁培养细胞，离心收集不少于1X 107细胞，再用预冷的双蒸水稀释至一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次，每次3000 rpm离心5 min。
2. 对于组织样本（200 mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，冰上剪碎，再用预冷双蒸水稀释至一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次。
3. 在上述细胞或组织样本中加入1 mL提取Buffer（使用前，每mL提取Buffer中加入1 μl蛋白酶抑制剂和1 μl DTT），将组织在4°C环境下置于预冷的玻璃匀浆器中，手动匀浆30~50次，匀质匀浆至没有明显的组织小块。或将细胞超声破碎，每次30 sec，3~4次，每次间隔1 min，置于冰上冷却，超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％。
4. 装入1.5 mL的预冷的离心管中，冰上放置10 min左右，期间取出剧烈振荡2~3次，于4°C，14000 rpm离心10 min，弃沉淀，上清转至新管中。
5. 上清置于37°C水浴10 min。再室温，14000 rpm离心5~20 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）
6. 取下层，加入500 μl冰冷灭菌水，4°C放置5 min，再置于37°C水浴10 min。
7. 室温，14000 rpm离心5~10 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
8. 取下层，加入500 μl冰冷灭菌水，4°C放置5 min，再置于37°C水浴10 min。
9. 室温，14000 rpm离心5~10 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
10. 最终得到的下层即为膜蛋白提取物，冷冻保存。
