产品名称】
通用名称：犬腺病毒 I 型检测试剂盒（实时荧光 PCR 法）
英文名称：Canine Adenovirus type I (CAV-I) Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】 & 50T/盒
【预期用途】
犬腺病毒是哺乳动物腺病毒属中致病性最强的一种病毒，有 I 型和 II 型两个分型。犬腺病毒 I 型可引起犬传染
性肝炎，本试剂盒适用于犬腺病毒 I 型基因检测，可用于临床犬腺病毒 I 型感染的辅助诊断，但不作确诊使用。
【检验原理】
本试剂盒针对犬腺病毒 I 型基因组高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含犬腺病毒 I 型基因组
模板的情况下，PCR 反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量 PCR 仪对 PCR 过程中相应通道信号进行实时监
测和输出，实现检测结果的定性分析。
【
注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含犬腺病毒 I 型靶基因的质粒。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期 12 个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad 系列、Agilent Stratagene MX 系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、
Rotor-Gene 系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量 PCR 仪。
【样本要求】
1.血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。
2.粪便标本：采集 1-10g 粪便（或用塑料杆人造纤维头的肛拭子两支）放入含有 10 ml PBS 或生理盐水无菌的 50ml
有螺旋盖的塑料瓶内，密封，4℃条件下立即送至有关实验室。
3.淋巴或肝脏样品：取少量样品（2～3 克）于研钵或匀浆器中研磨，然后将研磨匀浆转入无菌离心管中，
3000rpm/min 离心 10 分钟取上清待检。
3.应避免标本间交叉污染。
【检验方法】
1. 试剂准备（试剂准备区）试剂准备（试剂准备区）
（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
单反液配制表(每份)
PCR 反应液
20 μL
（3）在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照 20 μL/管分装量将试剂分装至 PCR 反应管。
（4）盖紧 PCR 反应管盖后将 PCR 反应管转移至样本处理区，剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。
2.样本准备（样本处理区）
用 QIAGEN、Roche 公司 DNA 提取试剂盒提取 DNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的 PCR 反应样本管中分别加入处理好的待测标本 DNA 各 5 μl、终体积 25 μl/管，盖好 PCR 反应盖
混匀后瞬时低速离心，转移到 PCR 仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加 5 μL 试剂盒自带的阴性对照或阳性对照
品，终体积为 25 μl/管，盖好 PCR 反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到 PCR 仪器上。
4.PCR（PCR 扩增区）
（
40
犬腺病毒 I 型检测试剂盒（实时荧光 PCR 法）说明书【参考值（参考范围）】
1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型 S 型扩增曲线或 Ct 值≤35。
（2）阴性对照：Ct 值＞38 或无 Ct 值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2.标本结果判定：
（1）阳性：标本检测结果 Ct 值≤35 或有明显指数增长期。
（2）可疑：标本检测结果 Ct 值在 35～38 范围内。此时应对标本进行重复检测，如重复实验结果 Ct 值仍在 35～
38 范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。
（3）阴性：标本检测结果 Ct 值＞38 或无 Ct 值。
【检验结果的解释】
通道及检测结果
标本检测结果解释
FAM
+
标本中检出犬腺病毒 I 型
-
标本中未检出犬腺病毒 I 型
【检验方法的局限性】
1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的最低检出限时可能会发生假阴性的结果。
2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成 RNA 降解而产生假阴性结果。
3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染，则容易得到假阳性结果。
【产品性能指标】 产品的最低检出限为 10 3 Copies/mL，产品 CV 值≤3%。
【注意事项】
1. 使用本试剂盒的实验室，应严格按照国家有关部分颁布的有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理；
2. 为避免 RNA 降解，样本处理过程应在 0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的
器具耗材应经过无核酶处理；
3. 各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染；检测结束后，应立即对工作台清洁；
4. 吸取反应液时，应尽量避免产生气泡；上 PCR 仪前，应注意检查各反应管是否盖紧，以免液体蒸发造成结果不
准确；
5. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心；
6. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放；
7. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触 PCR 反应管，并应避免在 PCR 反应管上进行任何标记；
8. 检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有 10%次氯酸的废物缸内，检测结束的 PCR 反应管，切忌开盖，并与其
他废弃物品一同灭菌后丢弃；工作台及各种实验用品应定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒；
9. 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用；并在有效期内使用。
