产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
HPV假病毒说明书
【产品名称】
通用名称：HPV假病毒
【包装规格】
15μl /30μl /50μl /100μl/管
【预期用途】
用于HPV抗血清或者单抗中和抗体滴度体外检测。
【检验原理】
中和抗体在体外与假病毒中和，使得部分假病毒丧失感染细胞的能力，进入细胞的假病毒会表达eGFP、RFP和E2-Crimson等荧光报告基因蛋白。通过Elispot读板仪扫描并计数每孔的荧光斑点数，将待测样品孔的荧光斑点数与假病毒对照组的荧光斑点数进行比较，可计算待测样品的抑制百分比。通过计算公式可以计算出当50%假病毒被抑制时抗体的稀释倍数，即ID50（Inhibition dilution），用ID50来表示抗体对假病毒的中和活性。ID50值越大，抗体中和活性越高。
【主要组成成分】
HPV假病毒颗粒，L1蛋白，报告基因
【储存条件及有效期】
-80℃ 密封贮存。有效期：长期。
避免反复冻融。
生产日期及有效期详见标签。
【样本要求】
样本为HPV假病毒，需在无菌条件下操作。
【使用方法】
1. 提前预铺细胞：中和实验所用细胞为HEK 293FT细胞（暂无其他推荐的替代细胞），提前2-6小时将HEK 293FT细胞消化，并加入96孔透明平底无菌细胞培养板中。
2. 待测样品系列稀释：在96孔无菌细胞培养板中，将待测样品进行系列稀释。
3. 病毒稀释：本产品为假病毒母液，客户依据报告中假病毒的滴度进行稀释使用（1TCID50=1荧光斑点）。
4. 待测样品与病毒混合孵育：将系列稀释后的待测样品与稀释后的假病毒溶液混合，4℃条件下孵育1小时。
5. 孵育结束后，将上述混合液与提前预铺的细胞进行混合。
6. 将细胞培养板置于37℃、5% CO2的二氧化碳培养箱中继续培养60-96小时。
7. 使用ELISPOT荧光斑点计数仪进行检测，计算感染抑制率（%）。
感染抑制率（%）=1-（样本检测值-细胞对照值）/（病毒对照值-细胞对照值）×100%。
8. 客户根据自定标准进行ID50计算（推荐使用Reed-Muench法）。
建议的96孔细胞培养板布局图
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| B | | 细胞对照（仅含有细胞） | 病毒对照（假病毒+细胞） |
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【阳性判断值】
1. 中和实验过程中必须设置细胞对照和病毒对照（见上，建议的布局图）。
2. 中和实验过程中需要设置阴性内控品及阳性内控品（客户自备）来判断实验是否成立。
【产品性能指标】
外观 外观应满足如下要求：包装完整，无破损，文字符号标识清晰。
【注意事项】
1. 本产品仅供中和抗体体外检测使用。
2. 本产品报告提供假病毒滴度。因细胞水平的中和抗体检测受细胞类型、细胞培养状态、环境条件等影响较大，客户需根据自身实验室条件确定细胞量、病毒加入量等中和实验参数。
3. 减少反复冻融，少量使用时建议分装储存。
4. 流水或者4℃融化使用。
5. 无菌操作。
6. 本产品不能扩增传代。
